氨苄青黴素溶液(100 mg/ml)

● 産品包裝：

● 産品簡介：

氨苄青黴素(Ampicillin, Amp)又稱安比西林、氨苄西林，是一種β-内酰胺類抗生(shēng)素,幹擾肽聚糖的交聯從(cóng)而抑制細菌細胞壁的合成。氨苄青黴素時常被用于分(fēn)子生(shēng)物學實驗研究中，如(rú)用于配制含氨苄青黴素的LB培養基或LB平闆等。氨苄青黴素溶液已經0.22 μm過濾除菌，可(kě)以直接添加到培養基中。一般推薦工(gōng)作(zuò)濃度爲50～100 μg/ml。

本氨苄青黴素溶液已經優化溶解液，可(kě)以保持溶液在-20℃下基本不結冰，方便使用的同時降低了反複凍融對抗性的影(yǐng)響。

● 貯存、效期及運輸：

-20℃保存；有效期6個月；濕冰運輸。

● 使用方法：

1. 取出-20℃保存的氨苄青黴素溶液，常溫徹底溶化，完全混勻。

注：溶液在-20℃下基本爲流動性溶液，如(rú)有冰晶形成，常溫徹底溶化後使用。

2.一般Amp在LB中終濃度爲50～100 μg/ml。可(kě)以大(dà)體(tǐ)按照(zhào)1/1000 LB體(tǐ)積加入100 mg/ml Amp溶液，如(rú)100 ml LB中加入50-100 μl Amp 100 mg/ml。

注：氨苄青黴素對高溫敏感，要等待LB瓊脂溫度低于55℃後再加入氨苄溶液。

  3. 在所有的細菌篩選抗生(shēng)素中，氨苄青黴素的穩定性最爲不佳，參照(zhào)下表确定使用的效期：

● 注意事(shì)項：

1. 衛星菌落：LB氨苄瓊脂平闆培養時間過長時，會發現一個大(dà)菌落的周圍會出現一些小的菌落，這些小的菌落稱爲衛星菌落（satellite colony）。原因：氨苄青黴素可(kě)以被β-内酰胺酶（β-lactamase）水解。平闆上的細菌産生(shēng)的β-内酰胺酶分(fēn)泌到細胞外，随着細菌的生(shēng)長，培養基中的β-内酰胺酶會不斷增加，這時培養基内氨苄青黴素會被降解，因此沒有氨苄抗性質粒的小菌群則環繞大(dà)菌落生(shēng)長，産生(shēng)衛星菌落。衛星菌落沒有氨苄抗性，挑取單菌落時，不要挑取衛星菌落培養。

2. 質粒丢失：氨苄抗性細菌在傳代的時候，會出現質粒丢失，傳代次數越多，質粒丢失的可(kě)能性越大(dà)。對于其他(tā)抗生(shēng)素如(rú)氯黴素，細菌如(rú)果丢失了部分(fēn)帶抗性的質粒，該菌在含有氯黴素的培養基中是不會生(shēng)長的。但(dàn)是對于氨苄則不然，在液體(tǐ)培養液中，培養時間過長的培養基中氨苄的濃度會降低，丢失了一部分(fēn)質粒的細菌也可(kě)以在其中生(shēng)長。因此對于使用氨苄作(zuò)爲抗性标記的克隆，每隔一段時間需要檢查細菌質粒丢失情況。比較直觀的辦法就(jiù)是通過SDS-PAGE，如(rú)果發現蛋白(bái)質的表達水平降低了，很大(dà)可(kě)能是因爲質粒丢失了，此時需要重新轉化重組載體(tǐ)。

3. 不要使用配制時間過長或超過效期的氨苄溶液。氨苄存儲時間過長或者保存不當，很有可(kě)能發生(shēng)降解。

4. 液體(tǐ)培養建議(yì)：在液體(tǐ)培養中，不要讓細菌長到過飽和，在LB培養基中，OD₆₀₀絕對不能超過3。如(rú)果是擴大(dà)培養，可(kě)以先把初始培養液内細菌沉澱，然後利用新鮮的培養液重懸，再進行下一步的培養，這樣可(kě)以大(dà)大(dà)減少β-内酰胺酶在液體(tǐ)中的含量。