10×酸性蛋白(bái)Native PAGE轉膜緩沖液

簡介：

10×酸性蛋白(bái)Native PAGE轉膜緩沖液适用于酸性蛋白(bái)電泳後凝膠上非變性酸性蛋白(bái)的轉膜。本轉膜液配制便捷，稀釋後無需調節pH值，pH約爲9.2。緩沖液主要成分(fēn)爲Tris，甘氨酸和微量SDS。該緩沖液最終可(kě)配成10升即用型1×緩沖液（要補加甲醇）。

保存條件(jiàn)：

粉末裝常溫保存，兩年(nián)有效。

配制方法：

将10×轉膜緩沖液粉末全部溶解于1升超純水中，徹底溶解，即配成10×轉膜緩沖液。根據下表配制成1×即用型轉膜緩沖液

使用方法：

1. 酸性蛋白(bái)非變性電泳：

各種蛋白(bái)質分(fēn)子由于所含的堿性氨基酸和酸性氨基酸的數目不同，因而有各自(zì)的等電點。凡堿性氨基酸含量較多的蛋白(bái)質稱爲堿性蛋白(bái)，等電點偏堿性，pI＞7，如(rú)組蛋白(bái)、精蛋白(bái)等。反之，凡酸性氨基酸含量較多的蛋白(bái)質，等電點就(jiù)偏酸性，pI＜7，自(zì)然界中大(dà)多數蛋白(bái)都(dōu)是酸性蛋白(bái)。分(fēn)離(lí)堿性蛋白(bái)時候，要利用低 pH 凝膠系統，分(fēn)離(lí)酸性蛋白(bái)時候，要利用高 pH 凝膠系統。酸性蛋白(bái)通常在非變性凝膠電泳中采用的 pH 是 8.8的緩沖系統，蛋白(bái)會帶負電荷，蛋白(bái)會相(xiàng)陽極移動；而堿性蛋白(bái)通常電泳是在微酸性環境下進行，蛋白(bái)帶正電荷，這時候需要将陰極和陽極倒置才可(kě)以電泳。酸性蛋白(bái)電泳可(kě)參考使用非變性PAGE凝膠制備及電泳試劑盒（貨号:RTD6130）。

2. 轉膜：

 ① 轉膜方法：酸性蛋白(bái)在非變性狀态的轉膜建議(yì)用濕轉法。

 ② 三明治結構：由于酸性蛋白(bái)pI＜7 在堿性轉膜緩沖液中帶負電荷，轉膜三明治結構與傳統轉膜相(xiàng)同，即根據“黑(hēi)膠白(bái)膜”制作(zuò)三明治，即膜置于轉膜夾芯正極一側，凝膠置于轉膜夾芯負極一側，這樣凝膠上帶負電荷的酸性蛋白(bái)才能轉移到膜上。

酸性蛋白(bái)轉膜三明治制作(zuò)：

負極（電轉夾黑(hēi)色面）-海綿墊-3至5層濾紙-凝膠-膜-3至5層濾紙-海綿墊-正極（電轉夾白(bái)色面）

 ③ 膜的選擇：膜可(kě)以用PVDF膜或NC膜，根據蛋白(bái)大(dà)小選擇膜的孔徑。一般說(shuō)來(lái)，大(dà)于20kD蛋白(bái)選擇0.45μm孔徑，低于20kD選擇0.22μm孔徑。PVDF膜使用前要用無水甲醇潤濕活化，NC膜隻需用轉膜緩沖液潤濕就(jiù)可(kě)以。

④ 轉膜條件(jiàn)：

由于在非變性條件(jiàn)下，不同酸性蛋白(bái)的空間結構，聚合狀态，電荷數量都(dōu)有不同，以下轉膜條件(jiàn)僅供參考，客戶針對自(zì)己的目的蛋白(bái)，最好經過1-2次預實驗後，确定最佳的轉膜條件(jiàn)。