Aureobasidin
A Solution
金擔子素A溶液 1mg/ml
● 産品包裝：
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産品編号
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産品名稱
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産品包裝
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說(shuō)明書(shū)
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AU0113S
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金擔子素A溶液(1mg/ml)
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1ml
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1份
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● Storage：-20℃
Stock solutions may be stored at-20°Cfor up to 12 months
● Specifications:
Appearance: Colorless, Clear methanol liquid
Sterilization：Filtration
Concentration：1mg/ml in methanol
● Introduction：
一、關于AbA：
金擔子素A（Aureobasidin
A，AbA）是從(cóng)絲狀真菌Aureobasidium
pullulans No. R106中分(fēn)離(lí)出來(lái)的環酯肽類抗生(shēng)素，具有很強的抗真菌能力。AbA作(zuò)用機(jī)制是抑制酵母中AUR1基因編碼的肌醇磷酰胺（inositol phosphorylceramide，IPC）合成酶的活性，幹擾鞘脂合成，從(cóng)而殺死菌株。AbA在較低的濃度下（0.1-0.5 μg/ml）即可(kě)對酵母産生(shēng)毒性。編碼IPC合成酶的基因研究較多的來(lái)自(zì)釀酒酵母菌的AUR1基因，以及構巢曲黴的AURA基因，兩者具有同源性。通過對編碼AUR1-C基因進行突變即可(kě)使得(de)菌株對AbA産生(shēng)抗性，作(zuò)爲蛋白(bái)質互作(zuò)研究的報告基因。
因爲AbA可(kě)以直接殺死敏感的酵母菌株，而不是延遲菌株生(shēng)長，所以AbA篩選有利于陽性克隆的生(shēng)長和識别。與營養報告基因（如(rú)HIS3）進行低嚴緊度初篩相(xiàng)比，AbA篩選大(dà)大(dà)消除了背景克隆。實際操作(zuò)中，用AbA進行初篩時會獲得(de)更多克隆，之後再用4個報告子(AUR1-C,HIS3, ADE2 和MEL1)進行高嚴緊度的二次篩選以驗證陽性克隆。AbA非常适合用作(zuò)陽性克隆子篩選用的藥物選擇性标記；也是酵母單/雙雜交研究中理(lǐ)想的報告子，可(kě)以簡化酵母雙雜交文庫篩選。
二、使用方法：
1.本品爲AbA的甲醇溶液，濃度爲1 mg/ml，直接用作(zuò)儲存液。
2.滅菌後YPD Agar培養基冷(lěng)卻至50-55 ℃，加入适量的AbA儲液，倒闆備用。（AbA工(gōng)作(zuò)濃度取決于宿主細胞的敏感度，見(jiàn)下表）
3.制備酵母感受态細胞并完成轉化。
4.把100 μl完成轉化酵母細胞懸液塗到含有适量AbA的YPD Agar培養基平闆上，30℃培養2-4天。
5.挑取克隆鑒定，或統計(jì)轉化效率。
三、不同菌株建議(yì)AbA的工(gōng)作(zuò)濃度：
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菌株
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MIC（μg/ml）
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S.cerevisiae
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ATCC9763（diploid）
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0.2-0.4
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Baker’s yeast（diploid）
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0.2-0.4
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Beer yeast（triploid or tetraploid）
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0.1
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SH3328（haploid）
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0.1
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Shochu yeast（diploid）
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0.1
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Sake yeast（diploid）
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0.1-0.2
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C.albicans
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TIMM-0136（diploid）
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0.04
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C.tropicalis
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TIMM-0324（diploid）
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0.08
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Schizo.pombe
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JY-745（monoploid）
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0.1
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四、對AbA敏感的真菌：
出牙酵母（Saccharomyces
cerevisiae）、粟酒裂殖酵母（Schizosaccharomyces pombe）、光(guāng)滑念珠菌（Candida glabrata）、構巢曲黴（Aspergillus
nidulans）和黑(hēi)曲黴（A. niger.）。