您好,歡迎光(guāng)臨中科(kē)瑞泰!

免費咨詢電話(huà):
400-699-0631

首頁 > 蛋白(bái)生(shēng)物學 > 蛋白(bái)電泳試劑盒 > BN電泳

10×BN轉膜緩沖液

10×BN轉膜緩沖液

産品編号:BC600P

産品規格:1升

數量
價格 ¥300


10×BN轉膜緩沖液

産品編号

産品名稱

規格

BC600P

10×BN轉膜緩沖液(粉末)

1

簡介:

10×BN轉膜緩沖液(10×Blue Native Transfer Buffer适用于BN蛋白(bái)電泳後凝膠上非變性蛋白(bái)的轉膜。本轉膜液配制便捷,稀釋後無需調節pH值,pH約爲7.5-7.7。該緩沖液最終可(kě)配成10升即用型1×緩沖液(根據需求補加甲醇)。

保存和運輸:

粉末裝常溫保存,常溫運輸,兩年(nián)有效;配成10×轉膜緩沖液後4℃貯存,一年(nián)有效;加入甲醇的即用型轉膜緩沖液4℃貯存,一個月有效。

配制方法:

10×轉膜緩沖液粉末全部溶解于1升超純水中,徹底溶解,即配成10×轉膜緩沖液。

根據下表配制成1×即用型轉膜緩沖液

 

1×即用型轉膜緩沖液

 

500 ml

1 L

2 L

10×轉膜緩沖液

50 ml

100 ml

200 ml

無水甲醇

甲醇終濃度0-20%

超純水

定容至 500 ml

定容至 1

定容至 2

 

不要調節pH

注:轉膜緩沖液中加入甲醇對蛋白(bái)有固定作(zuò)用,轉膜分(fēn)子量較大(dà)的蛋白(bái)少加或不加甲醇,轉膜分(fēn)子量較小的蛋白(bái)要加至多20%的甲醇。非變性蛋白(bái)的轉膜可(kě)以不加甲醇。

使用方法:

1. BN電泳介紹:

Blue Native PAGE(BN-PAGE)是一種從(cóng)生(shēng)物樣品(質膜,胞漿等)中分(fēn)離(lí)分(fēn)子量10 kD-10 M kD 範圍的蛋白(bái)質複合物的電泳技術(shù)。其原理(lǐ)是用溫和去(qù)污劑(如(rú) DDM,digitonin)将蛋白(bái)複合體(tǐ)從(cóng)細胞膜中以近似天然的狀态分(fēn)離(lí)出來(lái),Blue Native PAGE (BN-PAGE)是用考馬斯亮藍 G-250 代替 SDS與蛋白(bái)結合而使其帶負電荷,根據蛋白(bái)分(fēn)子量不同在 PAGE膠中得(de)到分(fēn)離(lí)。BN-PAGE由于考馬斯亮藍G-250存在,使蛋白(bái)都(dōu)覆蓋上負電荷,可(kě)以分(fēn)離(lí)堿性蛋白(bái)(pI>7)。BN電泳可(kě)以選擇Blue/Clear 非變性凝膠電泳試劑盒(U型闆3-12%預制膠,通用型)(貨号:RTD6139-0312或RTD6139-0416)

2. 電泳後凝膠預處理(lǐ)(可(kě)選步驟):

凝膠浸泡于适量1×即用型BN轉膜緩沖液(加終濃度0.1% SDS)中,搖床慢(màn)搖10分(fēn)鍾。

注:凝膠浸泡在含SDS緩沖液中,能讓蛋白(bái)帶上更多的負電荷,有利于蛋白(bái)的轉膜。

3. 轉膜:

3.1轉膜方法:BN電泳後的轉膜建議(yì)用濕轉法。

3.2膜的選擇:BN電泳轉膜必須使用PVDF膜,不能用NC(NC膜會與考馬斯亮藍G-250不可(kě)逆結合,很難清除幹淨)。根據蛋白(bái)大(dà)小選擇膜的孔徑。一般說(shuō)來(lái),大(dà)于20 kD蛋白(bái)選擇0.45 μm孔徑,低于20 kD選擇0.22 μm孔徑。PVDF膜使用前要用無水甲醇潤濕活化。

3.3 三明治結構:轉膜三明治結構與傳統轉膜相(xiàng)同,即根據“黑(hēi)膠白(bái)膜”制作(zuò)三明治,即膜置于轉膜夾芯正極一側,凝膠置于轉膜夾芯負極一側,這樣凝膠上帶負電荷的蛋白(bái)才能轉移到膜上。

蛋白(bái)轉膜三明治制作(zuò):

負極(電轉夾黑(hēi)色面)-海綿墊-11 mm厚度濾紙-凝膠--11 mm厚度濾紙-海綿墊-

極(電轉夾白(bái)色面)



3.4 轉膜條件(jiàn):

由于在非變性條件(jiàn)下,不同蛋白(bái)的空間結構,聚合狀态,電荷數量都(dōu)有不同,以下轉膜條件(jiàn)僅供參考,客戶針對自(zì)己的目的蛋白(bái),最好經過1-2次預實驗後,确定最佳的轉膜條件(jiàn)。

蛋白(bái)大(dà)小

穩流

建議(yì)時間

降溫措施

低于70kD

150 mA

1 小時

不需要

70-300 kD

200 mA

1.5-2 小時

需要

高于300 kD

200 mA

2.5-3.5 小時

需要

4. 洗膜:

PVDF膜用無水甲醇清洗10分(fēn)鍾,徹底去(qù)除藍色G250。

5. 進行後續WB操作(zuò):封閉-一抗-二抗-檢測。




 
隻有購(gòu)買過該商品的用戶才能進行評價。[發表評價]