DAPI染色液（DAPI Stain Solution,10 μg/ml）

●  産品組成：

● 産品簡介：

DAPI染色液(DAPI Staining Solution)是适用于常見(jiàn)細胞和組織細胞核染色的染色液。 DAPI即 2-(4-Amidinophenyl)-6-indolecarbamidine dihydrochloride，也稱DAPI dihydrochloride，分(fēn)子式爲C₁₆H₁₅N₅? 2HCl ，MW爲350.25，CAS Number 28718-90-3。

DAPI是一種可(kě)以穿透細胞膜的藍色熒光(guāng)染料，它可(kě)以用于活細胞和固定細胞的染色。和EB(ethidium bromide)相(xiàng)比，對雙鏈DNA的染色靈敏度要高很多倍，DAPI和雙鏈DNA結合後可(kě)以産生(shēng)比DAPI自(zì)身(shēn)強20多倍的熒光(guāng)。 DAPI染色常用于細胞凋亡檢測，染色後用熒光(guāng)顯微鏡觀察或流式細胞儀檢測。DAPI也常用于普通的細胞核染色以及某些特定情況下的雙鏈DNA染色。 DAPI的最大(dà)激發波長爲340nm，最大(dà)發射波長爲488nm；DAPI和雙鏈DNA結合後，最大(dà)激發波長爲364nm，最大(dà)發射波長爲454nm。 DAPI的發射光(guāng)爲藍色，且DAPI和綠色熒光(guāng)蛋白(bái)GFP或Texas Red染劑(紅(hóng)色熒光(guāng)染劑)的發射波長僅有少部分(fēn)重疊，可(kě)以利用這項特性在單一的樣品上進行多重熒光(guāng)染色。

本DAPI染色液爲即用型，濃度爲10μg/ml，可(kě)以直接用于固定細胞或組織的細胞核染色。

● 貯存：

-20℃避光(guāng)保存，一年(nián)有效。

● 操作(zuò)步驟：

一 懸浮細胞染色

1.1 500 g（2400 rpm，下同）離(lí)心收集細胞樣品于1.5 ml離(lí)心管内，加入0.5 ml固定液（貨号：KA5010，卡諾固定液），緩緩懸起細胞，常溫固定10分(fēn)鍾或更長時間(可(kě)4℃過夜)。

1.2離(lí)心去(qù)盡固定液，用PBS洗兩遍，每次3分(fēn)鍾，洗滌期間手動晃動數次。

1.3 細胞沉澱中加入200 μl DAPI染色液，重懸細胞，37℃避光(guāng)染色10-15分(fēn)鍾，手動晃動數次。

1.4 離(lí)心收集沉澱，重懸于100 μl 1×PBS中。

1.5 取5 μl抗熒光(guāng)淬滅封片液（貨号：AM0510）于載玻片上，加入等體(tǐ)積步驟1.4染色後細胞重懸液，蓋上一潔淨的蓋玻片，盡量避免氣泡。

1.6 熒光(guāng)顯微鏡下紫外激發觀察可(kě)檢測到呈藍色的細胞核。

注：熒光(guāng)染料都(dōu)存在淬滅的問(wèn)題，建議(yì)染色後盡快(kuài)檢測。

二 貼壁細胞染色

2.1 取潔淨蓋玻片在70%乙醇中浸泡5分(fēn)鍾或更長時間，無菌超淨台内吹幹或用無菌的PBS洗滌三遍，再用細胞培養液洗滌一遍。将蓋玻片置于六孔闆内，種入細胞培養過夜，生(shēng)長至50%-80%滿度。

2.2刺激細胞發生(shēng)凋亡後，吸盡培養液，加入0.5 ml固定液，固定10分(fēn)鍾或更長時間(可(kě)4℃過夜)。

2.3去(qù)盡固定液，用PBS洗兩遍，每次3分(fēn)鍾，吸盡液體(tǐ)。洗滌時宜用搖床或手動晃動。

2.4加入0.5 ml DAPI染色液，37℃避光(guāng)染色10-15分(fēn)鍾，手動晃動數次。

2.5去(qù)盡染色液，用PBS洗兩遍，每次3分(fēn)鍾，吸盡液體(tǐ)。洗滌時宜用搖床或手動晃動。

2.6滴一滴抗熒光(guāng)淬滅封片液（貨号：AM0510）于載玻片上，蓋上貼有細胞的蓋玻片，讓細胞接觸封片液，盡量避免氣泡。

2.7熒光(guāng)顯微鏡下紫外激發觀察可(kě)檢測到呈藍色的細胞核。

注：熒光(guāng)染料都(dōu)存在淬滅的問(wèn)題，建議(yì)染色後盡快(kuài)檢測

實驗示例：

操作(zuò)流程：使用不同濃度星飽菌素（Staurosporine，STS）凋亡處理(lǐ)Jurkat細胞。調整細胞密度爲1×10⁶/ml，每孔2 ml接種于六孔闆中；加入終濃度爲0，0.1，0.5，1 μM STS，37℃ 5%CO₂培養3小時；500 g 3 min收集細胞；細胞沉澱中加入1 ml固定液，常溫固定10 min；1×PBS漂洗兩次；細胞沉澱中加入0.5 ml DAPI染色液，37℃避光(guāng)染色10 min；離(lí)心後細胞沉澱重懸于100 μl 1×PBS中；取5 μl細胞懸液滴于載玻片上，加5 μl 抗熒光(guāng)淬滅劑，封片觀察。