離(lí)心式快(kuài)速脫鹽柱(5 kD)

● 産品介紹

離(lí)心式快(kuài)速脫鹽柱根據排阻層析原理(lǐ)可(kě)以出色地完成蛋白(bái)脫鹽或緩沖液置換，适用于高于5 kD蛋白(bái)樣品的脫鹽、緩沖液置換或小分(fēn)子去(qù)除。該産品回收率高，幾乎等體(tǐ)積回收蛋白(bái)樣品，在脫鹽的同時保持高回收率，樣品不會被稀釋。簡單使用離(lí)心操作(zuò)，無需裝柱，代替比較耗時的傳統透析處理(lǐ)，以達到快(kuài)速蛋白(bái)樣品脫鹽純化以及替換蛋白(bái)質緩沖液的目的。

脫鹽柱參數如(rú)下：

● 貯存、運輸和效期：

常溫貯存（不能冷(lěng)凍）；常溫運輸；有效期兩年(nián)。

● 注意事(shì)項：

1. 操作(zuò)方便，免去(qù)了繁瑣的透析過程，15-20分(fēn)鍾内即可(kě)完成樣品處理(lǐ)。

2. 本脫鹽柱建議(yì)一次性使用，不建議(yì)重複使用。

● 操作(zuò)步驟

1. 取脫鹽柱，放(fàng)入2 ml收集管中。  

2. 加入400 μl滅菌水或樣品所需的緩沖液，常溫靜(jìng)置5 min，1000×g（約3000 rpm）離(lí)心2 min。

注：離(lí)心力不要高于1000 g，過高的離(lí)心力會損傷填料，降低脫鹽效率。

3. 重複步驟2操作(zuò)2次。

4. 樣品準備：

樣品在上樣前建議(yì)離(lí)心取上清或用0.22 μm或0.45 μm濾膜過濾，減少雜質影(yǐng)響。

5. 脫鹽處理(lǐ)：

脫鹽柱轉移到新的1.5 ml離(lí)心管中，脫鹽柱中加入100-200 μl需要處理(lǐ)的蛋白(bái)樣品，靜(jìng)置30秒，1000×g（約3000 rpm）離(lí)心2 min，收集回收樣品，保存備用。

注：爲了确保從(cóng)小體(tǐ)積樣品中獲得(de)最大(dà)的蛋白(bái)回收效率，低于100 μl樣品上樣後要在樣品完全吸收後向填料中加入适當體(tǐ)積的超純水或緩沖液壓層，使得(de)總上樣體(tǐ)積爲100 μl。

● 注意事(shì)項

1. 回收效果：樣品脫鹽後的回收率與樣品的濃度，以及上樣體(tǐ)積相(xiàng)關。樣品濃度越高，其回收率越高；同時在推薦的樣品上樣量範圍内，上樣量越大(dà)，其回收率也會随之升高。通常脫鹽後蛋白(bái)的回收率在70-90%。

2. 樣品處理(lǐ)體(tǐ)積要在柱子處理(lǐ)範圍内，該脫鹽柱最多處理(lǐ)體(tǐ)積是200 μl樣品，過多會導緻收集 

管中液體(tǐ)浸沒到脫鹽柱。

3. 填料在高濃度醇溶液或飽和鹽溶液中會有失水收縮現象，請(qǐng)勿将上述溶液進行過柱；

4. 加樣時盡量均勻加至管中心位置；

5. 當樣品濃度過低時（<0.01 mg/ml)，需先将樣品濃縮到所需體(tǐ)積或所需濃度。

● 常見(jiàn)問(wèn)題

 實驗示例：

          離(lí)心式快(kuài)速脫鹽柱脫鹽處理(lǐ)樣品
樣品1（lane1-5）：細菌裂解物（正常鹽濃度）
lane1，2，3：細菌裂解物上樣5μl，4μl，3μl；
lane4，5：100μl細菌裂解物經過脫鹽柱處理(lǐ)後，上樣5μl
lane 4：S公司脫鹽柱；lane 5：Real-Times脫鹽柱
結論：脫鹽柱對裂解物所有蛋白(bái)都(dōu)有較好的回收率（80%）

樣品2（lane 6-8）：BSA溶液
lane 6: BSA水溶液（0.4μg/μl）上樣量5μl（2μg）
lane 7：BSA 0.5M NaCl溶液（0.4μg/μl）上樣量5μl（2μg） 
lane 8：BSA 0.5M NaCl溶液脫鹽柱處理(lǐ)上樣量5μl
結論：脫鹽柱脫鹽處理(lǐ)效果明顯（含鹽BSA電泳泳道明顯變寬）
           脫鹽後的BSA回收率可(kě)達90%

脫鹽程序：脫鹽柱中加入400μl超純水，常溫靜(jìng)置5min，1000 g
離(lí)心3min，重複2次；脫鹽柱放(fàng)入新的1.5ml離(lí)心管中，加入0.1ml
細菌裂解物或0.2ml BSA溶液，靜(jìng)置30S，1000g離(lí)心3min。

電泳：4-18% RealPAGE預制膠，1×TGS，200V 37-13mA 53min，
FastBlue蛋白(bái)染色液染色30分(fēn)鍾。