RealECL發光(guāng)液

● 産品組成：

● 産品簡介：

RealECL 是一種超敏ECL化學發光(guāng)試劑盒，可(kě)與二抗上耦連的辣根過氧化物酶（HRP）發生(shēng)化學反應，發出熒光(guāng)，從(cóng)而可(kě)以通過用X光(guāng)片壓片或其它适當熒光(guāng)成像設備檢測樣品。RealECL具有極高靈敏度和高信噪比，可(kě)檢測出10-100 fg的微量抗原；發光(guāng)迅速，熒光(guāng)可(kě)使X感光(guāng)膠片感光(guāng)達12小時以上，特别适用于痕量蛋白(bái)檢測；另外高靈敏度可(kě)以大(dà)大(dà)節省寶貴的樣品以及非常昂貴的一抗和二抗的用量，降低實驗成本。

● 貯存：

  2-8℃貯存，有效期一年(nián)。

● 注意事(shì)項：

1 RealECL A液和B液在吸取過程中必須要更換槍頭，A液和B液相(xiàng)互污染後會導緻A液或B液逐漸失效，影(yǐng)響後續的使用效果。

2 各溶液使用後，請(qǐng)蓋緊瓶蓋，以防失效。

3 爲獲得(de)最佳實驗結果，請(qǐng)務必優化實驗條件(jiàn)，包括檢測樣品的用量、一抗、二抗稀釋度、雜交膜及封閉試劑的選擇。

4 由于疊氮鈉是HRP抑制劑，在緩沖液中應避免使用疊氮鈉作(zuò)爲防腐劑；如(rú)果二抗中含有疊氮鈉，發光(guāng)實驗前要進行5次TBST或PBST漂洗，每次10分(fēn)鍾。

5 在與膜發生(shēng)接觸過程中，請(qǐng)佩戴手套且使用幹淨鑷子等潔淨器材，避免蛋白(bái)污染産生(shēng)高背景。

● 使用說(shuō)明：

1 RealECL工(gōng)作(zuò)液的配制：等體(tǐ)積混合适量RealECL A液和B液，室溫放(fàng)置備用。工(gōng)作(zuò)液宜在臨檢測前配制。

2 Western二抗孵育後，并進行數次洗滌後，用平頭鑷子将膜取出，用濾紙略吸去(qù)過多的液體(tǐ)(切勿接觸膜的蛋白(bái)面)，但(dàn)不要使膜過度幹燥，然後将膜平鋪于一潔淨保鮮膜上，避免産生(shēng)氣泡。

注：某些市售保鮮膜包裹印迹膜時會淬滅熒光(guāng)，請(qǐng)選擇ECL專用保鮮膜獲得(de)更好的實驗效果。

3 根據膜的大(dà)小，按每平方厘米膜加0.125 ml RealECL工(gōng)作(zuò)液的比例，滴加RealECL工(gōng)作(zuò)液到膜上，确保使工(gōng)作(zuò)液均勻覆蓋在膜上，常溫放(fàng)置1-2分(fēn)鍾。

注：爲達節約目的可(kě)将膜減小但(dàn)勿降低發光(guāng)液用量，确保發光(guāng)液完全覆蓋于膜上。

4将保鮮膜折起來(lái)完全包裹雜交膜，去(qù)除氣泡和皺褶，可(kě)剪去(qù)邊緣部多餘的保鮮膜。用濾紙吸去(qù)多餘的發光(guāng)工(gōng)作(zuò)液。用膠帶将覆蓋雜交膜的保鮮膜固定在暗盒内。

5在黑(hēi)暗中放(fàng)入X感光(guāng)膠片，分(fēn)别曝光(guāng)不同的時間如(rú)數秒到數分(fēn)鍾，顯影(yǐng)定影(yǐng)觀察沖洗結果。如(rú)掌握不好曝光(guāng)時間，可(kě)以在膜上放(fàng)置3-4張X感光(guāng)膠片，統一曝光(guāng)3-5分(fēn)鍾，顯影(yǐng)後選擇一張曝光(guāng)最好的膠片。

應用示例：

綠蘿總蛋白(bái)，RbcL一抗 1：2000，羊抗兔IgG-HRP 1：2000

a PVDF膜用抗體(tǐ)清除液處理(lǐ)後再用RealECL曝光(guāng)。