革蘭氏染色試劑盒（Gram Staining Kit）

●  産品組成：

● 産品簡介：

革蘭氏染色法（Gram Stain）是細菌學中廣泛使用的一種鑒别染色法，通過結晶紫初染和碘液媒染後，在細胞壁内形成了不溶于水的結晶紫與碘的複合物，革蘭氏陽性菌細胞壁較厚，肽聚糖網層次較多且交聯緻密，乙醇脫色時，肽聚糖脫水使孔徑縮小，故保留結晶紫-碘複合物在細胞膜上，呈紫色。革蘭氏陰性菌細胞壁薄、外膜層類脂含量高、肽聚糖層薄且交聯度差，脫色後類脂外膜迅速溶解，縫隙加大(dà)，結晶紫與碘複合物溶出，因此乙醇脫色後再經番紅(hóng)複染，呈紅(hóng)色。

● 貯存和運輸：

常溫保存，有效期一年(nián)；常溫運輸。

● 操作(zuò)步驟：

一 标本處理(lǐ)：

有菌部位的标本，如(rú)痰液、糞便、各種拭子、創面等可(kě)直接塗片。

無菌部位的标本，如(rú)腦脊液、胸水、腹水、膽汁、尿液、關節液等，應取适量标本（最高可(kě)達

5-7 ml）,經 3000rpm 離(lí)心 10min，取沉渣塗片染色。

二 塗片制作(zuò)：

菌液塗片時，用接種環沾取菌液點在載玻片上，标本可(kě)直接在玻片上塗布；菌落塗片時，先取生(shēng)理(lǐ)鹽水一滴，置載玻片上，用接種針挑取菌落在鹽水中塗布。制作(zuò)的塗片應自(zì)然幹燥，并經火(huǒ)焰固定，固定的溫度不宜過高，以玻片背面接觸手背不燙爲準，否則可(kě)能使細菌形态改變。将固定後的塗片進行染色。

三 染色

一般包括初染、媒染、脫色、複染等四個步驟，具體(tǐ)操作(zuò)方法是：

3.1 初染：加上結晶紫染色液後，染色 1 分(fēn)鍾，水洗。

3.2 媒染：加上革蘭氏碘液後染色 1 分(fēn)鍾，水洗。

3.3 脫色：加上脫色液（95%酒精）,搖動玻片,根據塗片厚度,脫色約 20-60秒，水洗，吸去(qù)水分(fēn)。

3.4 複染：加上番紅(hóng)染色液後，染色 1 分(fēn)鍾，水洗，吸幹或在空氣中涼幹後，油鏡鏡檢。

四 結果：

葡萄球菌：紫色、球形、葡萄狀排列。大(dà)腸杆菌：紅(hóng)色、杆狀、散在排列。

          葡萄球菌-革蘭氏陽性菌  紫色                             大(dà)腸杆菌-革蘭氏陰性菌 紅(hóng)色

革蘭氏染色的關鍵在于嚴格掌握酒精脫色程度，如(rú)脫色過度，則陽性菌可(kě)被誤染爲陰性菌；而脫色不夠時，陰性菌可(kě)被誤染爲陽性菌。此外，菌齡也影(yǐng)響染色結果，如(rú)陽性菌培養時間過長，或已死亡及部分(fēn)菌體(tǐ)自(zì)行溶解，都(dōu)常呈陰性反應。

● 注意事(shì)項：

1．标本塗片不能太厚，嚴格按操作(zuò)要求進行。若塗片較厚，應延長脫色時間，直至不再出現紫色爲止。

2．玻片通過火(huǒ)焰溫度不能太高。

3．革蘭氏碘液變透明，則不能使用。

4．水洗時動作(zuò)要輕柔,沿載玻片對角線方向用洗瓶沖洗,以免把菌體(tǐ)沖掉。