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GoldView核酸染色劑
● 産品介紹:
GoldView 是一種可(kě)代替溴化乙錠(EB)的新型DNA染料,其靈敏度與EB相(xiàng)當,使用方法與之完全相(xiàng)同。在紫外燈下雙鏈DNA呈現綠色熒光(guāng)。通過小鼠皮下注射實驗,尚未發現GoldView有緻癌作(zuò)用。
● 貯存、運輸和效期:
常溫貯存;常溫運輸;有效期兩年(nián)。
● 實驗操作(zuò)步驟:
1. 瓊脂糖電泳凝膠的制備及染色(預染法):
1. 按照(zhào)所需濃度稱取瓊脂糖,加入TAE或TBE緩沖液,在微波爐中加熱(rè)至徹底溶解。
2. 等凝膠溫度降至大(dà)約50-60℃以下時,按照(zhào)稀釋10000倍加入Goldview溶液,如(rú)100 ml凝膠加入10 μl;徹底搖勻後鋪膠并插入梳子。
3. 凝固後,将梳子輕輕拔出。
4. 上樣電泳,電泳結束後紫外觀察。
注:預染法,Goldview染色會出現陰陽膠現象,即随着電泳時間延長,較小的片段會染色不清楚,(參見(jiàn)實驗示例),此時可(kě)以将凝膠用後染法染色即可(kě)看(kàn)到小片段條帶。
2. 瓊脂糖電泳凝膠的制備及染色(後染法):
1. 按照(zhào)所需濃度稱取瓊脂糖,加入TAE或TBE緩沖液,在微波爐中加熱(rè)至徹底溶解。
2. 等凝膠溫度降至大(dà)約50-60℃以下時,不要加入Goldview溶液,直接鋪膠并插入梳子。
3. 凝固後,将梳子輕輕拔出。
4. 上樣電泳。
5. 電泳結束後将凝膠浸泡在含有Goldview溶液的TAE或TBE染色液中(染色液配制:100 ml 緩沖液中加入100-200 μl Goldview溶液,混勻)染色15-20分(fēn)鍾;TAE或TBE緩沖液中脫色10-15分(fēn)鍾。
6. 紫外觀察結果。
● 注意事(shì)項:
1. 膠厚度不要超過0.5cm,膠太厚會影(yǐng)響檢測的靈敏度。
2. GoldView在pH
3.6-7.0之間能更好地與核酸結合,因此電泳時最好使用新鮮的電泳緩沖液。
3. 由于GoldView染色後DNA産生(shēng)綠色熒光(guāng),因此不适于用一般單色膠卷拍(pāi)照(zhào),可(kě)以使用凝膠
成像系統保存圖象。
4. GoldView特别适合于大(dà)片段DNA的檢測(大(dà)于1kb的片段,檢測靈敏度與EB相(xiàng)當);當DNA
片段小于1kb時,檢測靈敏度低于EB,特别是低于500bp的片段,GoldView可(kě)能亮度很弱
或檢測不到。
5. 雖然尚未發現GoldView有緻癌作(zuò)用,但(dàn)由于GoldView溶液酸性較強,因此對皮膚、眼睛會
有一定的刺激,操作(zuò)時應戴手套。
● 實驗示例:
引用GV001 Goldview核酸染色劑發表文章(zhāng)
1. [2016 IF=2.3] Isolation and
identification of bacteria from rhizosphere soil and their effect on plant
growth promotion and root-knot nematode disease.
Author: Dan Zhao, Hui Zhao, Di Zhao, Xiaofeng Zhu, Yuanyuan Wang,
Yuxi Duan, Yuanhu Xuan,Lijie Chen
Product:GV001 Goldview核酸染色劑
Journal: Biological Control 119,12-19,2018
Institution:Shenyang Agricultural University
Paper link: https://www.sciencedirect.com/science/article/abs/pii/S1049964418300045