碘化丙啶染色液（Propidium Iodide Staining Solution）

●  産品組成：

● 産品簡介：

碘化丙啶(propidium iodide，PI)，分(fēn)子式C₂₇H₃₄I₂N₄ ，MW 668.39，CAS：25535-16-4。碘化丙啶不能穿過完整的活細胞膜，即正常細胞和凋亡細胞在不固定的情況下對PI拒染，而壞死細胞由于失去(qù)膜的完整性，PI可(kě)進入細胞内與DNA結合，根據此特點，使用PI染色可(kě)鑒别死細胞。如(rú)果使用PI對活細胞染色必須在染色前進行固定，以增加細胞膜對染料的通透性。PI經常被用來(lái)與 Calcein-AM 或者 FDA等熒光(guāng)探針一起使用，能同時對活細胞和死細胞染色。 PI-DNA複合物的激發和發射波長分(fēn)别爲 535 nm 和615 nm。常用于流式細胞儀分(fēn)析和顯微鏡觀察，檢測細胞凋亡(apoptosis)或細胞壞死(necrosis)。

本産品爲 PI 水溶液，濃度爲 1 mg/ml（1.5 mM）。使用時根據實驗不同直接将本産品用相(xiàng)應溶液稀釋到工(gōng)作(zuò)濃度。

● 貯存：

-20℃保存，一年(nián)有效。

● 操作(zuò)步驟：

一 懸浮細胞染色

1.1 500 g（2400 rpm，下同）離(lí)心收集細胞樣品于1.5 ml離(lí)心管内，加入0.5 ml固定液（貨号：KA5010，卡諾固定液），緩緩懸起細胞，常溫固定10分(fēn)鍾或更長時間(可(kě)4℃過夜)。

1.2離(lí)心去(qù)盡固定液，用PBS洗兩遍，每次3分(fēn)鍾，洗滌期間手動晃動數次。

1.3 細胞沉澱中加入200μl 1×PBS重懸，加入10 μl 碘化丙啶染色液，37℃避光(guāng)染色10-15分(fēn)鍾，手動晃動數次。

1.4 離(lí)心收集沉澱，重懸于100 μl 1×PBS中。

1.5 取5 μl抗熒光(guāng)淬滅封片液（貨号：AM0510）于載玻片上，加入等體(tǐ)積步驟1.4染色後細胞重懸液，蓋上一潔淨的蓋玻片，盡量避免氣泡。

1.6 熒光(guāng)顯微鏡下觀察可(kě)檢測到呈紅(hóng)色的細胞核。激發波長爲535 nm，發射波長爲615 nm。

注：熒光(guāng)染料都(dōu)存在淬滅的問(wèn)題，建議(yì)染色後盡快(kuài)檢測。

二 貼壁細胞染色

2.1 取潔淨蓋玻片在70%乙醇中浸泡5分(fēn)鍾或更長時間，無菌超淨台内吹幹或用無菌的PBS洗滌三遍，再用細胞培養液洗滌一遍。将蓋玻片置于六孔闆内，種入細胞培養過夜，生(shēng)長至50%-80%滿度。

2.2刺激細胞發生(shēng)凋亡後，吸盡培養液，加入0.5 ml固定液，固定10分(fēn)鍾或更長時間(可(kě)4℃過夜)。

2.3去(qù)盡固定液，用PBS洗兩遍，每次3分(fēn)鍾，吸盡液體(tǐ)。洗滌時宜用搖床或手動晃動。

2.4加入0.5 ml PBS，加入25 μl碘化丙啶染色液，37℃避光(guāng)染色10-15分(fēn)鍾，手動晃動數次。

2.5去(qù)盡染色液，用PBS洗兩遍，每次3分(fēn)鍾，吸盡液體(tǐ)。洗滌時宜用搖床或手動晃動。

2.6滴一滴抗熒光(guāng)淬滅封片液（貨号：AM0510）于載玻片上，蓋上貼有細胞的蓋玻片，讓細胞接觸封片液，盡量避免氣泡。

2.7熒光(guāng)顯微鏡下觀察可(kě)檢測到呈紅(hóng)色的細胞核。激發波長爲535 nm，發射波長爲615 nm。

注：熒光(guāng)染料都(dōu)存在淬滅的問(wèn)題，建議(yì)染色後盡快(kuài)檢測。

● 實驗示例：

操作(zuò)流程： 胰酶消化液消化，計(jì)數2×10⁶/ml