Western無蛋白(bái)快(kuài)速封閉液

Protein Free Rapid Blocking Buffer for WB

● 産品組成：

● 産品簡介：

本産品專爲快(kuài)速高效封閉Western Blot 轉印膜而設計(jì)，采用無蛋白(bái)配方，避免抗體(tǐ)與封閉劑的非特異結合，最大(dà)程度地降低了背景。同時，本封閉劑無内源的磷酸化蛋白(bái)及生(shēng)物素，對磷酸化特異抗體(tǐ)及生(shēng)物素檢測也不會産生(shēng)幹擾。本封閉劑不與蛋白(bái)産生(shēng)非特異性結合，因而隻封閉膜而不會屏蔽樣品蛋白(bái)的抗體(tǐ)識别位點，大(dà)大(dà)提高了抗體(tǐ)檢測靈敏度。實驗表明，本封閉劑對許多抗體(tǐ)都(dōu)有不同程度的信号增強作(zuò)用。然而這種信号增強作(zuò)用因抗體(tǐ)而異，對某一特定抗體(tǐ)，并不一定具有确定的信号增強作(zuò)用。

注意： 沒有任何一種封閉劑能适合所有抗原和抗體(tǐ)的檢測系統。如(rú)出現本試劑不适合的抗體(tǐ)，請(qǐng)替換使用其它種類的封閉劑如(rú)BSA或脫脂奶粉等。

● 貯存：

  2-8℃貯存，有效期一年(nián)。

● 注意事(shì)項：

1. 快(kuài)速高效：10-60 min内完成封閉；隻結合封閉轉印膜而不結合蛋白(bái)，因此不會屏蔽樣品蛋白(bái)的抗體(tǐ)識别位點，與傳統的脫脂奶粉和BSA 封閉相(xiàng)比信噪比更高；

2. 方便快(kuài)捷：無需稀釋，即取即用；

3. 性能可(kě)靠：無蛋白(bái)配方，與抗體(tǐ)無交叉反應；

4. 應用範圍廣：無磷酸化蛋白(bái)，無生(shēng)物素，尤其适合磷酸化特異抗體(tǐ)及生(shēng)物素檢測系統；

5. 節省抗體(tǐ)：使用本封閉劑後，所需的最适抗體(tǐ)濃度低于常規使用濃度，可(kě)大(dà)大(dà)節省抗體(tǐ)使用量。

6. 與PVDF膜相(xiàng)比，NC膜需要更長時間的封閉。

● 使用說(shuō)明：

1. 本産品無需稀釋，開蓋即用。

2. 完成轉膜後，使用TBST漂洗轉印膜3次，每次5分(fēn)鍾；

3. 将轉印膜放(fàng)入到雜交孵育盒中，加入10-20 ml 無蛋白(bái)快(kuài)速封閉液完全覆蓋轉印膜，置于搖床輕輕搖動，參考下表确定封閉時間：

注意：使用本産品，PVDF膜和NC膜使用推薦封閉時間，經多種抗體(tǐ)的測試封閉效果顯著優于常規的BSA封閉1 h。對于一些背景非常高的抗體(tǐ)，可(kě)以嘗試延長封閉時間。如(rú)有特殊需要，也可(kě)4℃封閉過夜。

● 實驗示例：

Jurkat細胞總蛋白(bái)GAPDH檢測

電泳條件(jiàn)：200 V 1×TGS 40-12 mA 53 min

轉膜條件(jiàn)：NC膜，1×RealBlot快(kuài)速轉膜液(Cat:RT5020)

植物葉綠體(tǐ)LHCa3檢測

Electrophoresis: 10% RealPAGE SDS Electrophorosis(RTD6148)

Transfer: 1×RealBlot transfer buffer(Cat:RT5020)

               350 mA blotting to NC membrane for 30 min.

Blocking: 無蛋白(bái)封閉液（Cat:PF1070） RT  for 20 min;

BSA at RT for 1 h.

Primary antibody: Lhca3（Cat:RGL2080） 1:2000 dilution at RT for 1h

Secondary antibody: 1:5000 dilution using Goat Anti-Rabbit IgG AP(Cat:AGR1030)

                Detection: using BCIP/NBT(Cat:BN1026) at RT for 5 min