1×MonoColor蛋白(bái)上樣緩沖液（單染料，變性，還(hái)原，無氣味）

● 産品簡介：

1×MonoColor蛋白(bái)上樣緩沖液(單染料，變性，還(hái)原，無氣味)是一種經過改良的以溴酚藍爲染料的蛋白(bái)上樣緩沖液。可(kě)以直接用于細胞或組織樣品的裂解，并用于後續常規的SDS-PAGE蛋白(bái)樣品的上樣。使用該産品直接裂解蛋白(bái)樣品的優點是比較便捷；缺點是裂解好的蛋白(bái)樣品不能用常規的蛋白(bái)定量方法測定蛋白(bái)濃度，這樣蛋白(bái)上樣量的均一性就(jiù)較難控制，需要借助考馬斯亮藍等的染色結果或Western的檢測結果，來(lái)調整上樣量。當細胞量或組織用量能控制得(de)比較均一時，使用本裂解液直接裂解獲取蛋白(bái)樣品會比較便捷。 

該産品使用了經典還(hái)原劑DTT和巯基乙醇的替代物，無DTT和巯基乙醇的不愉快(kuài)氣味，無毒，無刺激性氣味。

● 保存條件(jiàn)：

-20℃保存，開封後有效期1年(nián)。

●  使用方法：

1. 在常溫或不超過37℃的水浴中溶解上樣緩沖液(1×)。水浴溶解後立即常溫存放(fàng)，盡量避免長時間置于水浴中。

2. 細胞樣品：

2.1 對于貼壁細胞：去(qù)除培養液，用PBS、生(shēng)理(lǐ)鹽水或無血清培養液洗一遍。按照(zhào)6 孔闆每孔（細胞數量~2.5×10⁶）加入150-250微升上樣緩沖液(1×)的比例加入裂解液。用槍吹打數下，使上樣緩沖液(1×)和細胞充分(fēn)接觸。通常上樣緩沖液(1×)接觸細胞1-2秒後，細胞就(jiù)會被裂解。裂解後的樣品收集到1.5 ml離(lí)心管内。

2.2 對于懸浮細胞：450 g 4℃離(lí)心5分(fēn)鍾收集細胞，棄上清，用手指把細胞用力彈散。按照(zhào)6孔闆（細胞數量~2.5×10⁶）每孔細胞加入150-250微升上樣緩沖液(1×)，再用手指輕彈以充分(fēn)裂解細胞。充分(fēn)裂解後應沒有明顯的細胞沉澱。

3.組織樣品：

3.1 把組織剪切成細小的碎片。

3.2 按照(zhào)每20毫克組織加入150-250微升上樣緩沖液(1×)的比例加入緩沖液。

注：如(rú)果裂解不充分(fēn)可(kě)以适當添加更多的上樣緩沖液，如(rú)果需要高濃度的蛋白(bái)樣品，可(kě)以适當減少上樣緩沖液的用量。

3.3 用玻璃勻漿器勻漿或者用27#針頭抽打5-10次，直至充分(fēn)裂解。

3.4 充分(fēn)裂解後，将樣品收集到1.5 ml離(lí)心管内。

注：如(rú)果組織樣品本身(shēn)非常細小，可(kě)以适當剪切後直接加入裂解液裂解，通過強烈渦旋震蕩使樣品裂解充分(fēn)。直接裂解的優點是比較方便，缺點是不如(rú)使用勻漿器那樣裂解得(de)比較充分(fēn)。

4. 95-100℃加熱(rè)10分(fēn)鍾，以充分(fēn)變性蛋白(bái)。

注：加熱(rè)前通常會發現蛋白(bái)樣品内有粘稠的半透明狀物體(tǐ)，通常在上樣緩沖液内加熱(rè)8-10分(fēn)鍾後該粘稠的半透明狀物體(tǐ)消失。如(rú)果起始時細胞或組織的用量較大(dà)，基因組DNA含量較高，加熱(rè)10分(fēn)鍾後有可(kě)能仍然比較粘稠或者有粘稠狀的半透明物體(tǐ)。此時需要再煮沸10分(fēn)鍾或者補加适量1×的上樣緩沖液後再煮沸5分(fēn)鍾。充分(fēn)煮沸後一方面可(kě)以使結合在基因組DNA上的蛋白(bái)充分(fēn)釋放(fàng)，同時會導緻基因組DNA的部分(fēn)斷裂從(cóng)而使粘稠感消失，這樣就(jiù)不會影(yǐng)響後續的上樣操作(zuò)了。

5. 樣品冷(lěng)卻到常溫後，12000 rpm離(lí)心2分(fēn)鍾，上清即可(kě)直接上樣到SDS-PAGE凝膠加樣孔内。通常電泳至藍色染料到達膠的底端處附近即可(kě)停止電泳。