PPA，Plant Tissue Culture Preservative Agents  

PPA –植物組織培養抗菌保護劑

使用操作(zuò)說(shuō)明

産品名稱:PPA- Plant Tissue Culture Preservative Agents

（植物組織培養抗菌保護劑）

貨号：PPA001-50ml

保存條件(jiàn)：4℃

運輸條件(jiàn)：常溫運輸

性狀：無色至琥珀色透明液體(tǐ)

pH 值：3.8

有效期：見(jiàn)瓶身(shēn)标簽說(shuō)明

産品描述：

1.    PPA是一種熱(rè)穩定的抗菌劑，用于植物組織培養中植物的微生(shēng)物污染防治與清除；

2.   在合理(lǐ)的使用劑量下，PPA是一種非常有效的植物組培抗菌劑與保護劑，不會對植物的生(shēng)長（如(rú)種子萌發，愈傷增殖、再生(shēng)等）産生(shēng)任何影(yǐng)響，可(kě)視爲培養基标準配方成份；

3.   PPA主要用于預防和消除來(lái)自(zì)空氣、水源或者人(rén)體(tǐ)接觸等外界因素導緻的植物組培過程中的微生(shēng)物污染，同時，對于植物内生(shēng)菌也同樣具有非常好的抑制效果；

4. PPA廣泛适用于絕大(dà)多數被子植物和裸子植物，但(dàn)是不推薦用于蕨類植物、藻類等水生(shēng)植物；

5.   PPA具有熱(rè)穩定性，能直接加入培養基高溫滅菌而不會影(yǐng)響使用效果，使用更加方便；

6.    PPA相(xiàng)對于常規抗生(shēng)素而言，性價比更高。

作(zuò)用機(jī)理(lǐ)：

PPA的活性成分(fēn)能滲透細菌或者真菌細胞壁，抑制呼吸作(zuò)用中三羧酸循環和電子傳遞鏈過程中關鍵酶的活性，同時也能阻斷細菌和真菌吸收和利用培養基中單糖和氨基酸的過程，從(cóng)而實現預防和清除植物組織培養過程中的微生(shēng)物污染。

相(xiàng)對抗生(shēng)素的優勢：

1.    PPA能廣泛抑制和清除細菌和真菌的污染，并防止真菌孢子的萌發；

2.    PPA是通過抑制多種酶的活性而達到抑菌效果，從(cóng)而能避免耐藥突變體(tǐ)的發生(shēng)；

3.    PPA具有熱(rè)穩定性，無需過濾滅菌，能直接加入培養基高溫滅菌而不會影(yǐng)響使用效

果，使用更加方便；

4.    PPA性價比更高，可(kě)更加廣泛的應用于更多的科(kē)學研究、作(zuò)物育種、組培苗工(gōng)廠(chǎng)化

生(shēng)産中。

以下操作(zuò)說(shuō)明是針對大(dà)多數情況下的常規使用說(shuō)明，必要時，可(kě)根據具體(tǐ)植物樣本情況進行适當調整。

1.    常規用量：

一般推薦使用使用濃度爲 0.05%-0.2%（1L 培養基中加入 0.5-2 ml PPA）;

愈傷增殖，器官形成，胚性組織發育等使用濃度爲 0.05%-0.075%（1L 培養基中加入 0.5-0.75 ml PPA）。

說(shuō)明：

(a) 含有 PPA的培養基無需在超淨工(gōng)作(zuò)台中分(fēn)裝，在培養基凝固以後将培養瓶/皿蓋子蓋好即可(kě)。如(rú)使用自(zì)動灌裝系統，建議(yì)在灌裝前後将分(fēn)裝管用高壓滅菌熱(rè)水處理(lǐ)；

(b) 如(rú)果培養基儲存液保存在無菌容器中并未經污染的情況下，加入 PPA配制的培養基無需再次過濾或者高溫滅菌。如(rú)果是營養培養基，如(rú)含有 200 mg/L 甚至更高濃度氨基酸或者蛋白(bái)質的培養基，建議(yì)過濾滅菌。

2.    植物内生(shēng)菌污染處理(lǐ)：

(a) 種子：PPA不推薦用于直接處理(lǐ)含有大(dà)量的細菌或真菌孢子的種子滅菌，對于種子離(lí)體(tǐ)萌發，建議(yì)先采用傳統方法消毒，然後置于含 2-3% PPA的全培養基礎鹽溶液中，輕輕攪拌 4-12 小時，此過程千萬不能添加 Tween20 和調節 pH，處理(lǐ)完成以後直接插入含有 PPA (草本植物 0.05-0.1%，木本植物 0.2%)的培養基裡(lǐ)；

(b) 外植體(tǐ)：以 1cm 外植體(tǐ)爲例，将外植體(tǐ)置于含 4-5% PPA的全培養基礎鹽溶液中，輕輕攪拌 4-12 小時，此過程千萬不能添加 Tween20 和調節 pH，處理(lǐ)完成以後直接插入含有 PPA (草本植物 0.05-0.1%，木本植物 0.2%)的培養基裡(lǐ)；

(c) 對于塊莖，球莖和鱗狀物的觀賞植物樣本：将其整體(tǐ)放(fàng)入傳統消毒劑中攪拌消毒處理(lǐ)以後，用水沖洗幹淨，将材料切成薄片，置于含 4-5% PPA的全培養基礎鹽培養液中，輕輕攪拌 4-12 小時，此過程千萬不能添加 Tween20 和調節 pH，處理(lǐ)完成以後無需沖洗直接插入含有 0.1-0.2%的 PPA的培養基裡(lǐ)進行培養。

3.   如(rú)果厚的外植體(tǐ)、污染嚴重的植株、種子等樣本經過以上處理(lǐ)仍得(de)不到理(lǐ)想效果，可(kě)嘗試以下操作(zuò)：

(a) 将材料浸泡在水中持續攪拌處理(lǐ)(松軟組織攪拌 1 小時，硬實組織攪拌 2 小時)；

(b) 将材料在含 50%的 PPA全培養基礎鹽溶液中攪拌處理(lǐ) 5-10 分(fēn)鍾，此過程千萬不能添加 Tween20 和調節 pH；

(c) 無需沖洗，将處理(lǐ)過的材料直接加入到培養基中即可(kě)。對于真菌污染，可(kě)在培養基中加入适當濃度的 PPA。對于真菌細菌混合性污染，建議(yì)在培養的第一個月的培養基中加入 0.05%-0.2%的 PPA。

4.    嚴重污染材料污染去(qù)除與搶救（重污染不超過一周）：

(a) 将污染的材料至于流水中用軟刷刷洗，然後置于含 50% PPA的無菌水溶液中攪拌

5-15 分(fēn)鍾，對于細菌或者混合性污染，建議(yì)使用 100% PPA與 0.6 g/L 的檸檬酸無菌水溶液按 1：1 混合的低 pH(2.8-3.2)的酸性溶液處理(lǐ)；

(b) 處理(lǐ)後的材料無需清洗，直接插入含 0.05%-0.25 的 PPA的培養基中培養至少一個月以上，其中前 10 天需要弱光(guāng)培養；對于一些真菌、孢子和細菌污染隐藏較深，PPA無法接觸到的部位，建議(yì)在初步的清洗以後，将材料切開，然後再放(fàng)入含 50% PPA的無菌水溶液中攪拌 5-15 分(fēn)鍾處理(lǐ)。

5.    農杆菌的去(qù)除：

共培養以後，将樣本用無菌水清洗，然後将樣本浸沒在 100% PPA（補充 4X 的培養基鹽溶液）中處理(lǐ) 2 分(fēn)鍾，取出後用無菌紙吸幹後并置于常用抗性培養基中培養，3 周後，更換到隻含有 0.05%-0.075% PPA (無常用抗生(shēng)素)的培養基中培養。

使用注意事(shì)項：

1. 在所有 PPA消毒處理(lǐ)外植體(tǐ)的過程中，盡量保證容器的體(tǐ)積足夠大(dà)，并使外植體(tǐ)材料所有面積與含 PPA 的處理(lǐ)溶液充分(fēn)接觸，以保證消毒效果；

2. 如(rú)果外植體(tǐ)出現高度氧化現象，不要扔棄，大(dà)約 50%的外植體(tǐ)在 4-6 周内即可(kě)恢複；

3. 50% PPA的處理(lǐ)溶液可(kě)以重複使用但(dàn)是不推薦，因爲使用次數和效果受外植體(tǐ)的體(tǐ)積與接種密度的影(yǐng)響。将 50% PPA的處理(lǐ)溶液保存在 4oC可(kě)适當延長其活性。

4. 如(rú)果 50% PPA溶液處理(lǐ)效果不理(lǐ)想，可(kě)采用 100% PPA溶液進行處理(lǐ)，處理(lǐ)方法相(xiàng)同，但(dàn)使用次數不得(de)超過 10 次。

安全說(shuō)明：

1. 雖然 PPA是無毒性的，但(dàn)是在使用過程中還(hái)需盡量避免直接與人(rén)體(tǐ)皮膚等直接接觸，建議(yì)使用時佩戴手套，保持空間空氣流通，如(rú)不慎吸入，先馬上因大(dà)量純淨水後立即就(jiù)醫，如(rú)不慎入眼，立刻用大(dà)量水沖洗眼睛 15 分(fēn)鍾，用肥皂清洗 PPA接觸過的皮膚部位；

2.  含 PPA的培養基垃圾處理(lǐ)與常規培養基處理(lǐ)方法相(xiàng)同。