Anti-GAPDH抗體(tǐ)（兔多抗）
Anti-GAPDH Antibody（Polyclonal Antibody from Rabbit）
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産品編号
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産品名稱
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規格
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RGA1240
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20 μl
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● 産品簡介
甘油醛-3- 磷酸脫氫酶（
Glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenase，GAPDH） 是糖酵解
（glycolysis）過程中的關鍵酶，分(fēn)子量爲37 kDa左右。它催化甘油醛-3-磷酸的氧化磷酸化反應。
GAPDH 作(zuò)爲管家基因在同種細胞或者組織中一般是恒定、高水平表達的，常用作(zuò)Western Blot
實驗的内參照(zhào)。
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來(lái)源
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用途及稀釋比例
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抗體(tǐ)類型
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GAPDH分(fēn)子量
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Rabbit
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WB 1:2000-5000
IHC 1:200-1000
IF 1:200-1000
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多克隆抗體(tǐ)
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36-38 kD
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注：WB, Western blot; IHC, Immunohistochemistry;
IF, Immunofluorescence
本抗體(tǐ)如(rú)果用于常規的Western檢測，稀釋5000倍，使用5 ml抗體(tǐ)，至少可(kě)以檢測20次。
● 貯存形式：
穩定溶液，1 mg/ml 抗體(tǐ)溶于PBS，50%甘油，pH7.2。
● 保存及運輸條件(jiàn)：
-20℃保存，一年(nián)有效；避免反複凍融；濕冰運輸。
● 使用說(shuō)明：
1. Western Blot雜交(ECL顯色)：1:2000-5000稀釋，常溫孵育1-2 h或4℃過夜。
2. 免疫熒光(guāng)（IF）和免疫組化（IHC）：1:200-1000稀釋。
三 實驗示例：
Jurkat總蛋白(bái)，細胞漿蛋白(bái)，細胞核蛋白(bái)GAPDH檢測
總蛋白(bái)提取：4×106 Jurkat細胞，2000 g 離(lí)心收集，去(qù)上清，沉澱中加入200 μl RIPA（加2 μl 100 mM PMSF），冰上裂解5分(fēn)鍾，4℃ 16000 g 15 分(fēn)鍾，上清即爲總蛋白(bái)（TP）。
細胞漿蛋白(bái)：4×106 Jurkat細胞，2000 g 離(lí)心收集，加入400 μl細胞漿蛋白(bái)抽提試劑A（加4 μl 100mM PMSF，加0.4 μl 1 M DTT），懸浮沉澱，冰浴15分(fēn)鍾；加入20 μl細胞漿蛋白(bái)抽提試劑B，混勻，冰上孵育1分(fēn)鍾，震蕩5秒，4℃ 16000g 10分(fēn)鍾，小心收集上清即爲細胞漿蛋白(bái)（C-Pr），不要觸及沉澱。
細胞核蛋白(bái)提取：沉澱用200 μl 1×PBS漂洗一次，4℃ 16000 g 2分(fēn)鍾；沉澱中加入200 μl 細胞核蛋白(bái)抽提試劑（加2 μl 100mM PMSF，加0.2 μl 1 M DTT），重懸沉澱，劇(jù)烈震蕩15秒，冰浴40分(fēn)鍾，每間隔10分(fēn)鍾劇(jù)烈震蕩15秒；4℃ 16000 g 5分(fēn)鍾，上清即爲細胞核蛋白(bái)（N-Pr）。
電泳：RTD6132-15%3.3C 200V 33-12 mA 55 min
轉膜：NC膜，1×RealBlot快(kuài)速轉膜液濕轉，穩流400 mA，電壓變化64-57 V，轉膜時間35 min
封閉：無蛋白(bái)快(kuài)速封閉液RT 20 min
一抗孵育：GAPDH 羊抗兔多抗，一抗稀釋液稀釋1：2000
二抗孵育：羊抗兔IgG-HRP，二抗稀釋液稀釋1：5000
檢測：ECL發光(guāng)檢測