SDS裂解液

● 産品包裝：

● 産品簡介：

SDS裂解液(SDS Lysis Buffer)是一種比較強烈的細胞組織裂解液，其主要成分(fēn)是Tris  (pH8.0)， SDS，EDTA等。SDS裂解液裂解得(de)到的蛋白(bái)樣品可(kě)以用于常規的Western、ChIP(染色質免疫共沉澱，chromatin immunoprecipitation)等。由于SDS裂解液有較強的裂解能力，IP或Co-IP實驗不建議(yì)使用該裂解液。由于含有較高濃度的SDS等幹擾物質，不能用傳統Bradford法測定由本裂解液裂解得(de)到樣品的蛋白(bái)濃度，可(kě)以使用BCA蛋白(bái)濃度測定試劑盒（貨号：RTP7102）或Bradford蛋白(bái)濃度測定試劑盒（去(qù)垢劑兼容型）（貨号：RTP7104）測定蛋白(bái)濃度。

● 貯存、效期及運輸：

常溫保存；有效期2年(nián)；常溫運輸。

● 注意事(shì)項：

1. 需自(zì)備蛋白(bái)酶抑制劑如(rú)PMSF。

2. 如(rú)果使用本SDS裂解液用于ChIP實驗，在對超聲後基因組DNA大(dà)小進行檢測時，如(rú)果采用瓊脂糖凝膠中添加花菁素類染料如(rú)GelRed或類似染料或使用含該類染料的DNA上樣緩沖液時，由于電泳時SDS會與此類染料結合形成異常條帶，條帶通常在600-1000 bp左右，因此會對超聲後基因組DNA大(dà)小的判斷造成一定的影(yǐng)響。建議(yì)采用後染方法即“電泳完畢後對瓊脂糖凝膠染色”的方式進行條帶大(dà)小的檢測，使用該方法不會有異常條帶出現，不影(yǐng)響對超聲後基因組DNA大(dà)小的判斷，而且條帶大(dà)小更準确。

● 使用說(shuō)明：

1.  準備SDS裂解液：

取适當量的裂解液，在使用前數分(fēn)鍾内加入1/100體(tǐ)積的100 mM PMSF（貨号：PM1790），使PMSF的最終濃度爲1 mM或加入其他(tā)蛋白(bái)酶抑制劑。

注：SDS裂解液低溫會析出結晶，以下操作(zuò)需保持常溫操作(zuò)。

2. 細胞蛋白(bái)提取：

2.1 貼壁細胞：去(qù)除培養液，加入适量1×PBS，輕柔漂洗一遍，不要擾動貼壁細胞。按照(zhào)6孔闆每孔加入100-200 μl裂解液的比例加入裂解液，移液器吹打數下，使裂解液和細胞充分(fēn)接觸，用細胞刮刀刮下細胞收集于1.5 ml離(lí)心管中。

2.2 懸浮細胞：450 g 4℃ 離(lí)心5 min收集細胞；用适量1×PBS重懸細胞，450 g 4℃ 離(lí)心5 min收集細胞；重複漂洗細胞一次；按照(zhào)細胞沉澱體(tǐ)積（PCM）20 μl加入200 μl 裂解液的比例加入SDS裂解液，混勻細胞沉澱。

注：2×10⁶ Jurkat細胞，其細胞沉澱體(tǐ)積（PCM，Packed Cell Volume）大(dà)約爲20 μl。

2.3 裂解細胞：

2.3.1 裂解混合物超聲波處理(lǐ)（超聲條件(jiàn)根據儀器調整）；如(rú)沒有超聲破碎儀，可(kě)以使用注射器用27G針頭處理(lǐ)裂解物10-15次（貨号：PE2719 ，蛋白(bái)提取針頭套裝），以徹底裂解細胞。

注：裂解中細胞會釋放(fàng)出變性的核酸，呈團狀粘稠透明樣，如(rú)不進行超聲或針頭裂解處理(lǐ)，會導緻裂解物非常粘稠，大(dà)大(dà)降低蛋白(bái)提取的得(de)率和純度。

2.3.2 裂解物95℃處理(lǐ)10分(fēn)鍾，間歇混勻。

2.4 離(lí)心收集上清：

充分(fēn)裂解後，常溫16000 g離(lí)心10分(fēn)鍾，取上清，即可(kě)進行後續的PAGE、Western等操作(zuò)。

3. 組織蛋白(bái)提取：

3.1 手術(shù)切除的組織塊迅速置于預冷(lěng)的生(shēng)理(lǐ)鹽水中，漂洗數次，洗淨組織血迹，用濾紙吸

幹組織表面液體(tǐ)，将組織切成細小的碎片。

3.2 按照(zhào)每20 mg組織加入200 μl裂解液的比例加入裂解液。(如(rú)果裂解不充分(fēn)可(kě)以适當添加更多的裂解液，如(rú)果需要高濃度的蛋白(bái)樣品，可(kě)以适當減少裂解液的用量。)

3.3 用玻璃勻漿器勻漿5-10次，收集勻漿後的裂解混合物，超聲波處理(lǐ)（超聲條件(jiàn)根據儀器調整）；如(rú)沒有超聲破碎儀，可(kě)以使用注射器用27G針頭處理(lǐ)裂解物10-15次（貨号：PE2719 ，蛋白(bái)提取針頭套裝），以徹底裂解細胞。

注：裂解中細胞會釋放(fàng)出變性的核酸，呈團狀粘稠透明樣，如(rú)不進行超聲或針頭裂解處理(lǐ)，會導緻裂解物非常粘稠，大(dà)大(dà)降低蛋白(bái)提取的得(de)率和純度。

3.4 裂解物95℃處理(lǐ)10分(fēn)鍾，間歇混勻。

3.5 常溫16000 g離(lí)心10分(fēn)鍾，取上清，即可(kě)進行後續的PAGE、Western等操作(zuò)。

●  實驗示例：

4-18% RealPAGE 預制膠

電泳條件(jiàn)：1×TGS 穩壓200V 38-13mA 50min;染色：FastBlue蛋白(bái)染色液染色30min。

樣品1（LD直裂）：2 ml K562細胞（6.5×106/ml），3000rpm 5min，沉澱用PBS清洗1次，離(lí)心後徹底去(qù)除PBS，加入130 μl超純水，100 μl5×loading buffer(變性，還(hái)原)，95度10 min，上樣5 μl。

樣品2（4K-BME）：1 ml 4K細菌細胞（O/N培養），13000  rpm 5min，離(lí)心後徹底去(qù)除殘餘液體(tǐ)，加入130 μl超純水，100 μl 5×loading buffer，95度10min，上樣7.5 μl。

樣品3：1 ml K562細胞（5×106/ml），3000 rpm 5 min，沉澱用PBS清洗1次，離(lí)心後徹底去(qù)除PBS，加入500 μl SDS裂解緩沖液，超聲處理(lǐ)（10%功率，開5S，關10S，2min），冰浴10 min或95度10min，間歇混勻，13000 rpm低溫離(lí)心10 min，取上清即爲總蛋白(bái)。加入5×loading buffer(變性,還(hái)原)調整樣品濃度爲2 μg/μl，95度5min，上樣5，7.5和10 μl。