NP-40裂解液
● 産品包裝：
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産品編号
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産品名稱
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産品包裝
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說(shuō)明書(shū)
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RL1070
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NP-40裂解液
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100ml
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1份
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● 産品簡介：
NP-40裂解液(NP-40 Lysis Buffer)是一種比較溫和的細胞組織裂解液。NP-40裂解液裂解得(de)到的蛋白(bái)樣品可(kě)以最大(dà)限度地保持蛋白(bái)的活性狀态（native），可(kě)以用于常規的Western、IP和co-IP和ELISA等。NP-40裂解液的主要成分(fēn)爲 Tris(pH7.4)，NaCl，NP-40等。用NP-40裂解液裂解得(de)到的蛋白(bái)樣品，可(kě)以用BCA蛋白(bái)濃度測定試劑盒測定蛋白(bái)濃度。由于含有較高濃度的去(qù)垢劑，不能用Bradford法測定樣品的蛋白(bái)濃度。
● 保存條件(jiàn)：
-20℃保存，一年(nián)有效。
● 注意事(shì)項：
1. 爲取得(de)最佳的使用效果，盡量避免過多的反複凍融。可(kě)以适當分(fēn)裝後使用。
2. 需自(zì)備蛋白(bái)酶抑制劑和磷酸酶抑制劑。
3. 裂解樣品的所有步驟都(dōu)需在冰上或4℃進行。
● 使用說(shuō)明：
1. 準備即用型裂解緩沖液：
向每1 ml 預冷(lěng)的裂解緩沖液中加入磷酸酶抑制劑（自(zì)備）、蛋白(bái)酶抑制劑（自(zì)備），混勻，冰上預冷(lěng)待用。注：即用型緩沖液建議(yì)現用現配，30分(fēn)鍾内使用。
2. 細胞總蛋白(bái)提取：
2.1 貼壁細胞：去(qù)除培養液，加入适量1×PBS，輕柔漂洗一遍，不要擾動貼壁細胞。按照(zhào)6孔闆每孔加入100-200 μl裂解液的比例加入裂解液，移液器吹打數下，使裂解液和細胞充分(fēn)接觸，冰上裂解細胞5分(fēn)鍾，用細胞刮刀刮下細胞收集于1.5 ml離(lí)心管中，冰上繼續裂解15分(fēn)鍾，間歇混勻。
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培養闆規格/培養皿表面積
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細胞量
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裂解液推薦使用量
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100 mm培養皿
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1.5×107
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0.5-1 ml
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60 mm培養皿
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5×106
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0.25-0.5 ml
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35 mm培養皿
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2×106
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0.2-0.4 ml
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6孔闆
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2.5×106
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100-200 μl
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24孔闆
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5×105
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100-150 μl
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96孔闆
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1×105
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50-100 μl
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2.2 懸浮細胞：450 g 4℃ 離(lí)心5 min收集細胞；用适量1×PBS重懸細胞，450 g 4℃ 離(lí)心5 min收集細胞；重複漂洗細胞一次；按照(zhào)細胞沉澱體(tǐ)積（PCM）20 μl加入200 μl 裂解緩沖液的比例加入裂解液，混勻細胞沉澱，冰浴處理(lǐ)15分(fēn)鍾，間歇混勻。
注：2×106 Jurkat細胞，其細胞沉澱體(tǐ)積（PCM，Packed Cell Volume）大(dà)約爲20 μl。
2.3 裂解細胞：
裂解混合物超聲波處理(lǐ)（超聲條件(jiàn)根據自(zì)有儀器調整）；如(rú)沒有超聲破碎儀，可(kě)以使用注射器用27G針頭處理(lǐ)裂解物10-15次（貨号：PE2719 ，蛋白(bái)提取針頭套裝），以徹底裂解細胞。冰浴處理(lǐ)15分(fēn)鍾。
注：裂解中細胞會釋放(fàng)出變性的核酸，呈團狀粘稠透明樣，如(rú)不進行超聲或針頭裂解處理(lǐ)，會導緻裂解物非常粘稠，大(dà)大(dà)降低蛋白(bái)提取得(de)率和純度。研究蛋白(bái)互作(zuò)實驗，如(rú)Co-IP，考慮到超聲處理(lǐ)會影(yǐng)響蛋白(bái)之間的結合，可(kě)以不進行超聲處理(lǐ)。
2.4 離(lí)心收集上清：
充分(fēn)裂解後，4℃ 16000 g離(lí)心10分(fēn)鍾，取上清，即可(kě)進行後續的PAGE、Western和免疫沉澱等操作(zuò)。
3. 組織樣品蛋白(bái)提取：
3.1 手術(shù)切除的組織塊迅速置于預冷(lěng)的PBS或生(shēng)理(lǐ)鹽水中，漂洗數次，洗淨組織血迹，用濾紙吸幹組織表面液體(tǐ)，将組織切成細小的碎片。
3.2 按照(zhào)每20 mg組織加入200 μl裂解液的比例加入即用型裂解液。(如(rú)果裂解不充分(fēn)可(kě)以适當添加更多的裂解液，如(rú)果需要高濃度的蛋白(bái)樣品，可(kě)以适當減少裂解液的用量。)
3.3 用玻璃勻漿器冰浴勻漿5-10次，收集勻漿後的裂解混合物，超聲波處理(lǐ)（超聲條件(jiàn)根據自(zì)有儀器調整）；如(rú)沒有超聲破碎儀，可(kě)以使用注射器用27G針頭處理(lǐ)裂解物10-15次（貨号：PE2719，蛋白(bái)提取針頭套裝）,以徹底裂解細胞。裂解物冰浴處理(lǐ)15分(fēn)鍾。
注：裂解中細胞會釋放(fàng)出變性的核酸，呈團狀粘稠透明樣，如(rú)不進行超聲或針頭裂解處理(lǐ)，會導緻裂解物非常粘稠，大(dà)大(dà)降低蛋白(bái)提取得(de)率和純度。
3.4 充分(fēn)裂解後，4℃ 16000 g離(lí)心10分(fēn)鍾，取上清，即可(kě)進行後續的PAGE、Western和免疫沉澱等操作(zuò)。
4. 注意事(shì)項
4.1 所有的試劑及器具均需預冷(lěng)後使用,以保持蛋白(bái)質的完整性和活性。
4.2 産品中的保存條件(jiàn)及有效期均以未開封情況下計(jì)算，爲了防止産品與空氣接觸發生(shēng)化學反應影(yǐng)響産品性能，将未使用完畢的組分(fēn)按存儲要求保存同時建議(yì)開封後的組分(fēn)盡快(kuài)使用完畢。
4.3 裂解細胞步驟使用超聲處理(lǐ)或針頭處理(lǐ)極其關鍵，否則蛋白(bái)得(de)率會很低。
4.4 一般常規提取的蛋白(bái)樣品，進行後續試驗不需要透析，但(dàn)如(rú)果需要較大(dà)量的提取蛋白(bái)或後續試驗結果不理(lǐ)想，則需要将提取的蛋白(bái)樣品進行透析脫鹽。
4.5 提取的蛋白(bái)質可(kě)以采用BCA蛋白(bái)濃度測定試劑盒（目錄号：RTP7102），由于裂解緩沖液中含有較高濃度的去(qù)垢劑，不能用Bradford法測定樣品的蛋白(bái)濃度。
4.6 如(rú)果用于蛋白(bái)質質譜研究，可(kě)采用快(kuài)速蛋白(bái)銅染試劑盒（貨号：RTD6207）或快(kuài)速蛋白(bái)鋅染試劑盒（貨号：RTD6206）或快(kuài)速蛋白(bái)銀染試劑盒（貨号：RTD6401）對膠上的蛋白(bái)質進行染色，這些染色方法對蛋白(bái)質沒有修飾作(zuò)用，所以對質譜圖沒有影(yǐng)響。對于一般的染色，可(kě)以采用FastBlue蛋白(bái)染色液（貨号：RTD6202）來(lái)染色。
實驗示例：
