10×RealBlot 快(kuài)速轉膜液

                 10×RealBlot Rapid Transfer buffer            

● 産品組成：

● 産品簡介：

快(kuài)速轉膜液使用獨特配方，能高效快(kuài)速地将蛋白(bái)轉移到印迹膜（PVDF或硝纖膜）上。使用濕轉法（Tank blot）或半幹轉法（Semi-dry blot）方法，能在10-40分(fēn)鍾内完成轉膜過程。

快(kuài)速和環保：快(kuài)速轉膜液不使用甲醇，減輕了對實驗者和環境的傷害。

兼容性好：快(kuài)速轉膜液能兼容Laemmli膠，預制膠，Bis-Tris膠等多種凝膠。

轉移效率高：快(kuài)速轉膜液對分(fēn)子量跨度較大(dà)的蛋白(bái)也有很好的轉移效率，有效解決了大(dà)小蛋白(bái)不能在同一張膜上同時轉移的問(wèn)題。

● 貯存及運輸：

  4-8℃貯存，有效期一年(nián)；常溫運輸。

● 使用說(shuō)明：

轉膜前的準備：

6-10張裁好的普通濾紙或Whatman3MM濾紙；裁好的轉印膜；足夠的1×快(kuài)速轉移buffer；無水甲醇（處理(lǐ)PVDF膜用）

一 濕轉法（Tank blot）：

1 按照(zhào)下表配制1×快(kuài)速轉膜液

2 将濾紙和海綿浸泡在1×快(kuài)速轉膜液中，完全浸濕，平衡5分(fēn)鍾。

3 PVDF膜使用前要用無水甲醇潤濕30秒，随後浸泡在1×快(kuài)速轉膜液中，完全浸濕，平衡5分(fēn)鍾；NC膜無需處理(lǐ)，直接浸泡在轉膜緩沖液中。

4 将凝膠在超純水中浸泡漂洗2分(fēn)鍾，去(qù)除膠表面的SDS；随後将凝膠浸泡在1×快(kuài)速轉膜液中。

注意：水中漂洗時間一定不能超過2分(fēn)鍾，否則分(fēn)子量較大(dà)的蛋白(bái)不能完全轉移。

5 按照(zhào)以下順序做好轉印三明治結構：

1 負極（陰極）

2 一塊海綿

3 濾紙（3張）

4 凝膠

5 轉印膜

6濾紙（3張）

7 一塊海綿（根據三明治的厚度選擇是否使用）

8 正極（陽極）

注意：  ① 要徹底清除三明治結構中的氣泡，适當補加1×快(kuài)速轉膜液保持三明治結構濕潤。

 ② 三明治結構的制作(zuò)不能太緊，也不能太松。太緊和太松都(dōu)會影(yǐng)響轉印效果。如(rú)果太緊的話(huà)，可(kě)以去(qù)除陽極一側的海綿。

6 将三明治結構放(fàng)于轉移槽中，轉印槽中灌滿1×快(kuài)速轉膜液。

7 濕轉推薦使用恒流轉移：

二 半幹轉（Semi-dry blot）：

1 按照(zhào)下表配制1×快(kuài)速轉膜液：

2 将濾紙浸泡在1×快(kuài)速轉膜液中，完全浸濕。

3 PVDF膜使用前要用無水甲醇潤濕30秒，浸泡在1×快(kuài)速轉膜液中，完全浸濕，平衡5分(fēn)鍾。NC膜無需處理(lǐ)，直接浸泡在轉膜緩沖液中。

4 将凝膠在超純水中浸泡漂洗2分(fēn)鍾，去(qù)除膠表面的SDS；随後将凝膠浸泡在1×快(kuài)速轉膜液中。

注意：水中漂洗時間不能超過2分(fēn)鍾，否則分(fēn)子量較大(dà)的蛋白(bái)可(kě)能不能完全轉移。

5 按照(zhào)以下順序做好轉印三明治結構：

1 負極（陰極）

2 下層濾紙（5張）

3 凝膠

4 轉印膜

5 上層濾紙（5張）

6 正極（陽極）

半幹轉時，濾紙、膠、膜之間的大(dà)小，一般是下層濾紙>=膜>=膠>=上層濾紙。上下兩層的濾紙一定不能接觸；濾紙、膠、膜之間千萬不能有氣泡，接觸的濾紙和氣泡會造成短(duǎn)路(lù)。

6 半幹轉推薦使用恒流轉移：

注：不同廠(chǎng)家半幹轉儀器設置可(kě)能有所不同，請(qǐng)根據廠(chǎng)家說(shuō)明書(shū)适當調整。

三 問(wèn)題解決：

 實驗示例：