半幹轉轉印對濾紙要求較高,要用超厚濾紙,如(rú)伯樂厚度2.4mm濾紙(伯樂貨号:1703965)。或者選擇半幹轉轉印濾布(貨号:SP1010)
5×RealBlot快(kuài)速半幹轉轉膜緩沖液
5×RealBlot Rapid Semi-Dry Transfer buffer Ver740158
● 産品組成:
貨号
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名稱
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規格
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RT5030
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5×RealBlot快(kuài)速半幹轉轉膜緩沖液
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500 ml
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說(shuō)明書(shū)
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一份
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● 産品簡介:
5×RealBlot快(kuài)速半幹轉轉膜緩沖液使用獨特配方,使用半幹轉法(Semi-dry blot)方法,能在10-15分(fēn)鍾内高效快(kuài)速地将蛋白(bái)轉移到印迹膜(PVDF膜或NC膜)上。
特點:
環境友好:快(kuài)速轉膜液不使用甲醇,減輕了對實驗者和環境的傷害。
兼容性好:快(kuài)速轉膜液能兼容Laemmli膠,預制膠,Bis-Tris膠等多種凝膠。
節省時間:快(kuài)速轉膜液能在10-15分(fēn)鍾内完成蛋白(bái)的轉印。
以每次轉印使用100 ml 1×RealBlot快(kuài)速半幹轉轉膜緩沖液計(jì)算,該産品可(kě)以使用25次。
● 貯存及運輸:
4-8℃貯存;有效期一年(nián);常溫運輸。
● 使用說(shuō)明:
轉膜前的準備:
2張半幹轉專用超厚濾紙(厚度2.4 mm)或者半幹轉轉印濾布(貨号:SP1010);裁好的轉印膜;足夠的1×RealBlot快(kuài)速半幹轉轉膜緩沖液;無水甲醇(處理(lǐ)PVDF膜用)
1 按照(zhào)下表配制1×RealBlot快(kuài)速半幹轉轉膜緩沖液:
加入順序
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1×快(kuài)速轉膜液配制量 200ml
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1
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5×快(kuài)速轉膜液
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40 ml
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2
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超純水
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120 ml
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3
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無水乙醇
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40 ml
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注:按照(zhào)順序加入各種溶液。如(rú)果加入轉膜液後沒有用水沖洗稱量容器,加入乙醇會産生(shēng)沉澱。
2 将濾紙或濾布浸泡在1×快(kuài)速轉膜液中,完全浸濕3-5分(fēn)鍾。
3 PVDF膜使用前要用無水甲醇潤濕30秒,浸泡在1×快(kuài)速轉膜液中,平衡5分(fēn)鍾。NC膜無需處理(lǐ),直接浸泡在轉膜緩沖液中。
4 将凝膠在超純水中浸泡漂洗2分(fēn)鍾,去(qù)除膠表面的SDS。
1 負極(陰極)
2一張超厚濾紙或四層濾布
3 凝膠
4 轉印膜
5一張超厚濾紙或四層濾布
6 正極(陽極)
6 用滾輪趕出氣泡。
7 半幹轉推薦使用恒流轉移:
分(fēn)子量範圍和凝膠厚度
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一塊小型膠(7.3×8.5 cm)
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兩塊小型膠(7.3×8.5 cm)
或一塊中型膠(8.5×13.5 cm)
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1.5 mm厚度凝膠
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下列條件(jiàn)基礎上增加2分(fēn)鍾
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下列條件(jiàn)基礎上增加2分(fēn)鍾
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高分(fēn)子量
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大(dà)于130 kD
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恒流1.3 A,15分(fēn)鍾
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恒流2.5 A,15分(fēn)鍾
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混合分(fēn)子量
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5-130 kD
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恒流1.3 A,10分(fēn)鍾
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恒流2.5 A,10分(fēn)鍾
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低分(fēn)子量
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小于30 kD
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恒流1.3 A,7分(fēn)鍾
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恒流2.5 A,7分(fēn)鍾
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注:不同廠(chǎng)家半幹轉儀器設置可(kě)能有所不同,請(qǐng)根據廠(chǎng)家說(shuō)明書(shū)适當調整。