Tris-Tricine-PAGE蛋白(bái)電泳試劑盒（含預制膠）

Tris-Tricine-PAGE Protein Electrophorosis Kit Contaning Precast Gels

● 貨品内容：

● 産品簡介：

Tris-Tricine-PAGE電泳試劑盒含有RealPAGE Tricine蛋白(bái)預制膠，可(kě)以用來(lái)檢測1-40 kD的多肽大(dà)小。試劑盒裡(lǐ)含有電泳緩沖液、上樣緩沖液和蛋白(bái)染色液，方便使用。

預制膠玻璃闆尺寸10×8.2 cm，凝膠尺寸8.3×7.5 cm，凝膠厚度1.1 mm，梳子12齒，最大(dà)上樣體(tǐ)積30 μl，兼容伯樂電泳槽。

該産品配套膠闆和緩沖液可(kě)以進行10次電泳。

● 貯存、運輸和效期：

按照(zhào)标簽溫度貯存；常溫運輸；有效期1個月。

● 使用說(shuō)明：

一. 電泳緩沖液配制：

10×Tris-Tricine -SDS緩沖液配制：

将10×Tris-Tricine -SDS緩沖液（10×TTS）粉末（Cat：CB010P）置于一幹淨的燒杯中，加入500ml超純水，徹底攪拌混勻，不要調節pH，即配成500ml 10×TTS緩沖液。用前稀釋10倍配成1×TTS緩沖液。

注：伯樂Mini III電泳槽一次電泳使用300-350 ml 1×TTS緩沖液。

二. 樣品處理(lǐ)：

      待上樣的檢測樣品與2×Tricine多肽上樣緩沖液[Cat：TP050]等體(tǐ)積混合，95℃處理(lǐ)5分(fēn)鍾後上樣。蛋白(bái)Marker一般已經含有上樣緩沖液，根據說(shuō)明書(shū)上樣（預染Marker不能加熱(rè)處理(lǐ)，非預染Marker上樣前一般要95℃處理(lǐ)5分(fēn)鍾）。

三. 電泳：

3.1 拆開預制膠包裝，将預制膠安裝在合适的電泳槽中。

注：伯樂Mini III或Mini-PROTEAN Tetra Cell，天能VE-180，六一24K系列電泳槽請(qǐng)确保密封條的安裝方向（右圖）。

六一其他(tā)系列，君意東方JY-SCZ2/4，百晶BG-verMINI等電泳槽可(kě)以直接使用預制膠。

不兼容Thermol系列電泳槽。

3.2 将電泳槽的内槽加滿1×TTS緩沖液，輕柔拔出梳子，用1ml移液器将梳孔吹洗幹淨，将Marker或蛋白(bái)樣品（已經過處理(lǐ)）加入點樣孔，穩壓電泳（表1），至藍色指示前沿至分(fēn)離(lí)膠下沿位置時即可(kě)停止電泳。整個電泳過程大(dà)約需要2.5-3個小時。

表1 多肽電泳條件(jiàn)

四.染色：（使用FastBlue蛋白(bái)染色液 Cat:RTD6202）

4.1 用前必讀(dú):

4.1.1 使用前如(rú)發現瓶中有少許沉澱，請(qǐng)混勻後使用。

4.1.2以下“使用方法”是針對0.75mm和1.0 mm厚度，10×10cm凝膠染色程序。

4.2 使用方法：

4.2.1. 将電泳後的PAGE膠取下放(fàng)入塑料容器中，加入适量染色液（以剛剛覆蓋過膠面爲适），蛋白(bái)條帶含量高于1μg的，染色1-2分(fēn)鍾即可(kě)見(jiàn)。

4.2.2. 搖床上常溫搖動10-15分(fēn)鍾，至條帶清晰可(kě)見(jiàn)滿足實驗要求後停止染色。

4.2.3. 蒸餾水漂洗凝膠，在蒸餾水中脫色搖動10-15分(fēn)鍾，至凝膠基本無藍色背景，拍(pāi)照(zhào)記錄結果。

五. 轉膜：

多肽轉膜選擇孔徑0.22 μm PVDF膜（用前用甲醇處理(lǐ)潤濕）或0.22 μm NC膜。

5.1 半幹轉：

使用伯樂Trans-Blot Turbo半幹轉機(jī)器請(qǐng)選擇配套的5×RealBlot快(kuài)速半幹轉轉膜緩沖液（貨号：RT5030）。轉膜推薦條件(jiàn)：一闆小型凝膠（8×10 cm）恒流，1.3 A，7 min。

5.2 濕轉：

濕轉轉膜緩沖液：

25 mM Tris,192 mM Glycine,0.1%SDS，20% Methanol,pH~8.3

轉膜條件(jiàn)：恒流200-300 mA  40-60 min

六. 實驗示例：