SDS-PAGE凝膠快(kuài)速制備及電泳試劑盒(貨号:RTD6116)
● 産品組成:
貨号
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名稱
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規格
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保存條件(jiàn)
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AC2914-02
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40%PAA(29:1)
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100 ml
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4℃
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TS050-01
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4×Tris/SDS分(fēn)離(lí)膠緩沖液 pH8.8
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100 ml
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4℃
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TS030-01
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4×Tris/SDS濃縮膠緩沖液 pH6.8
|
50 ml
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4℃
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AP020P
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APS(幹粉)
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0.5 g
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RT
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TA0761-01
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TEMED
|
0.5ml
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4℃,避光(guāng)
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PL080
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5×MonoColor蛋白(bái)上樣緩沖液(含還(hái)原劑)
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1 ml
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-20℃
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TG120P
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5×Tris-甘氨酸電泳緩沖液(幹粉)
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1 L
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RT
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說(shuō)明書(shū)
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一份
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● 産品簡介:
本公司提供的SDS-PAGE蛋白(bái)電泳試劑盒包含凝膠制備以及蛋白(bái)電泳所需的全部試劑。本試劑盒可(kě)配制至少50塊常規大(dà)小的PAGE膠。
● 使用說(shuō)明:
一 配制分(fēn)離(lí)膠(各試劑使用量請(qǐng)參考表二)
根據目的蛋白(bái)的分(fēn)子量大(dà)小選擇合适的凝膠濃度(表一),再按照(zhào)下面的分(fēn)離(lí)膠配方表(表二)配制SDS-PAGE的分(fēn)離(lí)膠(即下層膠)。
表一 不同濃度的SDS-PAGE分(fēn)離(lí)膠的最佳分(fēn)離(lí)範圍:
SDS-PAGE分(fēn)離(lí)膠濃度
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最佳分(fēn)離(lí)範圍
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6%
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50-150kD
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8%
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30-90kD
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10%
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20-80kD
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12%
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12-60kD
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15%
|
10-40kD
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配制分(fēn)離(lí)膠前,根據以下配方準備10% APS:
10% APS配制-5 ml:将0.5 gAPS幹粉溶于5 ml滅菌水中,徹底溶解後分(fēn)裝,1 ml/支,-20℃備存,每次取一管使用。10% APS應盡量減少室溫存放(fàng)時間,以防失效。10%APS在4℃有效期爲一周,-20℃有效期6個月。若發現凝膠聚合時間延長,應考慮更換使用-20度保存的10%APS。
制備分(fēn)離(lí)膠步驟:
1.參照(zhào)凝膠模具說(shuō)明書(shū),裝配好凝膠模具。
2.按照(zhào)表二将不同體(tǐ)積的成分(fēn)在小燒杯或試管中混合;加入10%APS和TEMED,輕輕攪拌使其混勻,避免産生(shēng)氣泡。
3.在凝膠模具中灌入适量分(fēn)離(lí)膠溶液(對于mini-gel,凝膠液加至約距前玻璃闆頂端1.5 cm或距梳齒約0.5 cm即可(kě)),然後在分(fēn)離(lí)膠溶液上輕輕覆蓋一層1-5
cm的水層,使凝膠表面保持平整。
4.靜(jìng)置30-60分(fēn)鍾,待分(fēn)離(lí)膠和水層之間出現一個清晰的界面後,說(shuō)明凝膠已聚合
表二 SDS-PAGE分(fēn)離(lí)膠配方表
組份
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不同凝膠體(tǐ)積對應各組份的取樣量(ml)
|
6% 膠 5ml 10ml 15ml 20ml
|
H2O
|
3
|
6
|
9
|
12
|
4×Tris/SDS分(fēn)離(lí)膠buffer
pH8.8
|
1.25
|
2.5
|
3.75
|
5
|
40% PAA(29:1)
|
0.75
|
1.5
|
2.25
|
3
|
TEMED
|
0.005
|
0.01
|
0.015
|
0.02
|
10% APS
|
0.05
|
0.1
|
0.15
|
0.2
|
8% 膠 5ml 10ml 15ml 20ml
|
H2O
|
2.7
|
5.4
|
8.1
|
10.8
|
4×Tris/SDS分(fēn)離(lí)膠buffer
pH8.8
|
1.25
|
2.5
|
3.75
|
5
|
40% PAA(29:1)
|
1
|
2
|
3
|
4
|
TEMED
|
0.005
|
0.01
|
0.015
|
0.02
|
10% APS
|
0.05
|
0.1
|
0.15
|
0.2
|
10% 膠 5ml 10ml 15ml 20ml
|
H2O
|
2.45
|
4.9
|
7.35
|
9.8
|
4×Tris/SDS分(fēn)離(lí)膠buffer
pH8.8
|
1.25
|
2.5
|
3.75
|
5
|
40% PAA(29:1)
|
1.25
|
2.5
|
3.75
|
5
|
TEMED
|
0.005
|
0.01
|
0.015
|
0.02
|
10% APS
|
0.05
|
0.1
|
0.15
|
0.2
|
12% 膠 5ml 10ml 15ml 20ml
|
H2O
|
2.2
|
4.4
|
6.6
|
8.8
|
4×Tris/SDS分(fēn)離(lí)膠buffer
pH8.8
|
1.25
|
2.5
|
3.75
|
5
|
40% PAA(29:1)
|
1.5
|
3
|
4.5
|
6
|
TEMED
|
0.005
|
0.01
|
0.015
|
0.02
|
10% APS
|
0.05
|
0.1
|
0.15
|
0.2
|
15% 膠 5ml 10ml 15ml 20ml
|
H2O
|
1.825
|
3.65
|
5.475
|
7.3
|
4×Tris/SDS分(fēn)離(lí)膠buffer
pH8.8
|
1.25
|
2.5
|
3.75
|
5
|
40% PAA(29:1)
|
1.875
|
3.75
|
5.625
|
7.
|
TEMED
|
0.005
|
0.01
|
0.015
|
0.02
|
10% APS
|
0.05
|
0.1
|
0.15
|
0.2
|
二 濃縮膠制備:
1.去(qù)除覆蓋在分(fēn)離(lí)膠上的水層。
2.按照(zhào)表三将不同體(tǐ)積成分(fēn)在一個小燒杯或試管中混合;加入10%過硫酸铵和TEMED,輕輕攪拌使其混勻,避免産生(shēng)氣泡。
3.将濃縮膠溶液加至分(fēn)離(lí)膠的上面,直至凝膠溶液到達前玻璃闆的頂端。
4.将梳子插入凝膠内,避免産生(shēng)氣泡。
5.靜(jìng)置30-60分(fēn)鍾,等待濃縮膠聚合。
表三 SDS-PAGE濃縮膠(4%)配方表
組份
|
不同凝膠體(tǐ)積對應各組份的取樣量(ml)
|
2 ml
|
4 ml
|
5 ml
|
10 ml
|
H2O
|
1.3
|
2.6
|
3.25
|
6.5
|
4×Tris/SDS濃縮膠buffer pH6.8
|
0.5
|
1
|
1.25
|
2.5
|
40% PAA(29:1)
|
0.2
|
0.4
|
0.5
|
1
|
TEMED
|
0.002
|
0.004
|
0.005
|
0.01
|
10% APS
|
0.02
|
0.04
|
0.05
|
0.1
|
三 電泳:
凝膠凝固好後,根據以下配方準備電泳緩沖液。
5×Tris-甘氨酸電泳緩沖液的配制-1 L:将一包5×Tris-甘氨酸電泳緩沖液幹粉全部倒入1L燒杯中,加入約900 ml水徹底溶解,用水定容至1 L,即配成5×Tris-甘氨酸電泳緩沖液(此溶液不用調節pH值)。用前再稀釋5倍即配成1×Tris-甘氨酸電泳緩沖液。
在電泳槽的内槽内加入1×Tris-甘氨酸電泳緩沖液(讓電泳緩沖液漫過加樣孔),輕輕的撥出梳子,随後在電泳槽外槽加入适量的1×Tris-甘氨酸電泳緩沖液。上樣,電泳,一般是濃縮膠80V,分(fēn)離(lí)膠120V恒壓,等指示前沿溴酚蘭電泳到分(fēn)離(lí)膠下緣後,結束電泳,染色或者進行下一步實驗。
下一步實驗。
引用RTD6116 SDS-PAGE凝膠快(kuài)速制備及電泳試劑盒發表文章(zhāng)
1. [2015 IF=1.15] Metal-Chelate
Affinity Precipitation with Thermo-Responsive Polymer for Purification of
ε-Poly-L-Lysine.
Product: RTD61116
SDS-PAGE凝膠快(kuài)速制備及電泳試劑盒
Author: Sipeng Li, Zhaoyang
Ding, Jifu Liu, Xuejun Cao
Journal: Appl
Biochem Biotechnol. 183, 4, 1254-1264,2017
Institution:Department of Bioengineering, East China University
of Science and Technology
Paper link:https://link.springer.com/article/10.1007/s12010-017-2495-3
2. [2013 IF=5.48] Rapid
Allergen Inactivation Using Atmospheric Pressure Cold Plasma.
Product: RTD61116
SDS-PAGE凝膠快(kuài)速制備及電泳試劑盒
Author: Yan
Wu,Yongdong Liang,Kai Wei,Wei Li,Maosheng Yao,Jue Zhang
Journal: Environmental
Science & Technology 48 (5), 2901–2909,2014
Institution: Peking
University
Paper
link:https://www.pubs.acs.org/doi/pdf/10.1021/es5003988
3. [2013 IF=3.95] MS2
Virus Inactivation by Atmospheric Pressure Cold Plasma Using Different Gas
Carriers and Power Levels.
Product: RTD61116
SDS-PAGE凝膠快(kuài)速制備及電泳試劑盒
Author: Yan
Wu1, Yongdong Liang2, Kai Wei, Wei Li, Maosheng Yao, Jue Zhang, Sergey A.
Grinshpun.
Journal: Appl.
Environ. Microbiol 2015 Feb;81(3):996-1002
Institution:Peking University
Paper
link:https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/25416775/