超低分(fēn)子量蛋白(bái)電泳試劑盒（非變性）（貨号：RTD6121）
● 産品組成：
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組分(fēn)貨号
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組分(fēn)
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名稱
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規格
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貯存
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運輸
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RTD6121-01
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組分(fēn)1
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2×多肽電泳濃縮膠緩沖液
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15 ml
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4℃
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常溫
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RTD6121-02
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組分(fēn)2
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2×多肽電泳分(fēn)離(lí)膠緩沖液
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30 ml
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4℃
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常溫
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RTD6121-03
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組分(fēn)3
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2×PAA溶液 超低濃縮膠用
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15 ml
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4℃
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常溫
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RTD6121-04
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組分(fēn)4
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2×PAA溶液 超低分(fēn)離(lí)膠用
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30 ml
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4℃
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常溫
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AP020P
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組分(fēn)5
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10% APS（幹粉）
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5 ml
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常溫
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常溫
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TA0761-01
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組分(fēn)6
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TEMED
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0.5 ml
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常溫
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常溫
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CB020P
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組分(fēn)7
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10×Tris-Tricine電泳緩沖液 (10×TT)
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500 ml（幹粉）
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常溫
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常溫
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TP070
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組分(fēn)8
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2×Tricine 上樣緩沖液（非變性，非還(hái)原）
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1 ml
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-20℃
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常溫
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RTD6202-02
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組分(fēn)9
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FastBlue蛋白(bái)染色液
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500 ml
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常溫
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常溫
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● 産品簡介：
本試劑盒含有超低分(fēn)子量蛋白(bái)電泳（多肽電泳）全套試劑，可(kě)以用來(lái)檢測非變性條件(jiàn)下1-20 kd的多肽大(dà)小。本試劑盒可(kě)配制至少10塊常規大(dà)小的PAGE膠（8×10cm）。具有以下特點：
1 配套試劑不含任何變性劑如(rú)SDS和還(hái)原劑如(rú)DTT或巯基乙醇，适用于非變性電泳。
注：凝膠和電泳緩沖液pH在8.3左右，非變性電泳适于檢測等電點小于8.3的蛋白(bái)，等電點近似或大(dà)于8.3的堿性蛋白(bái)不适合檢測。
2 分(fēn)辨率高：凝膠緩沖液獨特配方，可(kě)以有效分(fēn)離(lí)1-5 kD多肽。
3 使用方便：配制凝膠時隻需1:1混合2×凝膠緩沖液和2×PAA溶液，加上APS和TEMED即可(kě)配制凝膠。
● 貯存和效期：
按照(zhào)标簽溫度貯存；開封後有效期一年(nián)。
● 使用說(shuō)明：
一. 10% APS配制：
10% APS配制-5 ml：将APS幹粉溶于5 ml滅菌水中，徹底溶解後分(fēn)裝，1 ml/支，-20℃備存，每次取一管使用。10% APS應盡量減少常溫存放(fàng)時間，以防失效。10%APS在4℃有效期爲一周，-20℃有效期6個月。若發現凝膠聚合時間延長，應考慮更換使用-20度保存的10% APS。
二. 制膠：
I 配制分(fēn)離(lí)膠
1．按照(zhào)表一将不同體(tǐ)積的成分(fēn)加入到小燒杯或離(lí)心管中混合；立即混勻5-10秒，以使溶液充分(fēn)混勻。
表一 （一塊1 mm mini膠用量）*
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分(fēn)離(lí)膠
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濃縮膠
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18％T /5 ml
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5％T /2 ml
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2×多肽電泳濃縮膠緩沖液
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/
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1 ml
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2×多肽電泳分(fēn)離(lí)膠緩沖液
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2.5 ml
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/
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2×PAA溶液 超低濃縮膠用
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/
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1 ml
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2×PAA溶液 超低分(fēn)離(lí)膠用
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2.5 ml
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/
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10％APS
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25-50 μl**
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20-30 μl
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TEMED
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2.5-5 μl
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2 μl
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注： * 如(rú)非必須，不要使用厚度1.5mm的凝膠，盡量使用厚度0.75m和1mm的凝膠，這樣會減少電泳後染色和脫色的時間。
** 凝膠的聚合時間與環境溫度有關。夏天溫度較高時，聚合較快(kuài)；冬天氣溫低時，聚合時間會延長。可(kě)以根據表二的标準條件(jiàn)調節催化劑的加入量。
表二 凝膠制備凝固時間表
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環境溫度
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20℃
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25℃
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分(fēn)離(lí)膠配制
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濃縮膠配制
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分(fēn)離(lí)膠配制
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濃縮膠配制
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分(fēn)離(lí)膠配制量
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5 ml
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-
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5 ml
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-
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濃縮膠配制量
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-
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2 ml
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-
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2 ml
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10%APS
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50 μl
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20 μl
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25 μl
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20 μl
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TEMED
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5 μl
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2 μl
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2.5 μl
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2 μl
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凝固時間
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5-10 分(fēn)鍾
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20-30 分(fēn)鍾
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5-10 分(fēn)鍾
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20-30 分(fēn)鍾
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2．在凝膠模具中迅速灌入适量分(fēn)離(lí)膠溶液，然後在分(fēn)離(lí)膠溶液上輕輕覆蓋一層1-3 cm的無水乙醇層，使凝膠表面保持平整。
3．靜(jìng)置5-10分(fēn)鍾，待分(fēn)離(lí)膠和乙醇層之間出現一個清晰的界面表示凝膠已聚合。
II 配制濃縮膠
去(qù)除覆蓋在分(fēn)離(lí)膠上的乙醇層，用濾紙将殘留的乙醇吸去(qù)。
1．按照(zhào)表一将不同成分(fēn)加入到小燒杯或離(lí)心管中混合；立即混勻5-10秒，以使溶液充分(fēn)混勻。
2．将梳子插入凝膠内，避免産生(shēng)氣泡。
3．靜(jìng)置20-30分(fēn)鍾待凝膠聚合
三. 電泳：
1. 10×Tris-Tricine緩沖液配制：
将10×Tris-Tricine緩沖液（10×TT）粉末（Cat No：CB020P）置于一幹淨的一升燒杯中，加入500ml超純水，徹底攪拌混勻，不要調節pH，即配成500ml 10×TT緩沖液。
表三 1×TT緩沖液配制
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1×TT配制量 500 ml
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1×TT配制量 1000 ml
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10×TT
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50 ml
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100 ml
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超純水
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450 ml
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900 ml
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注：伯樂Mini
III電泳槽一次電泳使用500ml 1×TT緩沖液。
2. 樣品處理(lǐ)：
待上樣的檢測樣品與2×Tricine上樣緩沖液（非變性，非還(hái)原）[Cat No：TP070]等體(tǐ)積混合，不要加熱(rè)，上樣。蛋白(bái)Marker選擇非變性專用Marker，根據說(shuō)明書(shū)使用。将電泳槽的内槽加滿1×TT緩沖液，輕柔拔出梳子，用1ml移液器将梳孔吹洗幹淨，将Marker或蛋白(bái)樣品（已經過處理(lǐ)）加入點樣孔，穩壓電泳（表四），至藍色指示前沿至分(fēn)離(lí)膠下沿位置時即可(kě)停止電泳。整個電泳過程大(dà)約需要2.5-3個小時。
表四 多肽電泳條件(jiàn)
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恒電壓
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150V
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起始電流
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60-75mA/闆膠
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結束電流
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15-25mA/闆膠
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電泳時間
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2.5-3小時
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四. 染色（使用組分(fēn)9-FastBlue蛋白(bái)染色液）：
4.1 将電泳後的PAGE膠取下放(fàng)入塑料容器中，蒸餾水漂洗一次；棄水，加入适量染色液（以剛
剛覆蓋過膠面爲适），條帶1-2分(fēn)鍾即可(kě)見(jiàn)。
4.2 搖床上常溫搖動10-15分(fēn)鍾至條帶清晰；觀察結果。