Tris-Tricine-PAGE凝膠制備及電泳試劑盒                    說(shuō)明書(shū)Ver 740468

● 産品組成：

● 産品簡介：

該産品含有多肽電泳全套試劑，可(kě)以用來(lái)檢測1-20 kd的多肽大(dà)小。本試劑盒可(kě)配制至少25塊常規大(dà)小（8×10cm）,厚度1 mm的PAGE膠。該産品具有以下特點：

1 适用範圍廣：制膠緩沖溶液中不含有SDS，适用于多肽的變性和非變性電泳。

2 分(fēn)辨率高：凝膠緩沖液獨特配方，可(kě)以有效分(fēn)離(lí)1-5 kD多肽。

3 使用方便：配制凝膠時隻需1:1混合濃縮膠或分(fēn)離(lí)膠溶液，不用計(jì)算；紅(hóng)色濃縮膠，易于觀察加樣孔，上樣方便。

4 綠色環保：不用單獨添加有刺激性氣味的催化劑如(rú)TEMED。

● 貯存、運輸及效期：

按照(zhào)标簽溫度貯存；常溫運輸；有效期一年(nián)。

● 使用說(shuō)明：

一. 凝膠促凝劑配制：

改良型凝膠促凝劑爲固體(tǐ)粉末，使用前加入5 ml雙蒸水溶解即配制成10% 凝膠促凝劑溶液，将溶液分(fēn)裝後置于-20℃保存，通常一年(nián)内有效。該溶液在4℃條件(jiàn)下可(kě)以穩定保存兩周。若發現凝膠聚合時間延長，應考慮更換使用-20℃保存的10% 凝膠促凝劑溶液。

二. 制膠：

1. 配制分(fēn)離(lí)膠:

1.1按照(zhào)表一将不同體(tǐ)積的成分(fēn)加入到小燒杯中混合；立即混勻5-10秒，以使溶液充分(fēn)混勻。                    表1 （一塊1 mm mini膠用量）*

注： * 如(rú)非必須，不要使用厚度1.5 mm的凝膠，盡量使用厚度0.75 mm和1 mm的凝膠，這樣會減少電泳後染色和脫色的時間。

1.2 在玻璃闆中迅速灌入适量分(fēn)離(lí)膠溶液，使液面和短(duǎn)玻璃闆上沿之間的距離(lí)比梳齒長0.5 cm即可(kě)。注：此溶液爲過量，請(qǐng)勿全部注入。

1.3 然後在分(fēn)離(lí)膠溶液上輕輕覆蓋一層1-2 cm的無水乙醇層，使凝膠表面保持平整。

1.4 靜(jìng)置10-20分(fēn)鍾，待分(fēn)離(lí)膠和乙醇層之間出現一個清晰的界面表示凝膠已聚合。

注：凝膠的聚合時間與環境溫度有關。夏天溫度較高時，聚合較快(kuài)；冬天氣溫低時，聚合時間會延長。可(kě)以根據表1的标準條件(jiàn)調節促凝劑的加入量。分(fēn)離(lí)膠25℃條件(jiàn)下，約20分(fēn)鍾可(kě)以聚合。

2. 配制濃縮膠:

去(qù)除覆蓋在分(fēn)離(lí)膠上的乙醇層，用濾紙将殘留的乙醇吸去(qù)。

2.1 按照(zhào)表一将不同成分(fēn)加入到小燒杯中混合；立即混勻5-10秒，以使溶液充分(fēn)混勻。

2.2 将梳子插入凝膠内，避免産生(shēng)氣泡。

2.3 靜(jìng)置30-40分(fēn)鍾待凝膠聚合。

注：凝膠的聚合時間與環境溫度有關。夏天溫度較高時，聚合較快(kuài)；冬天氣溫低時，聚合時間會延長。可(kě)以根據表1的标準條件(jiàn)調節促凝劑的加入量。濃縮膠25℃條件(jiàn)下，約40分(fēn)鍾可(kě)以聚合。

三. 電泳：

3.1 變性電泳：

3.1.1 10×Tris-Tricine- SDS緩沖液配制：

将10×Tris-Tricine -SDS緩沖液（10×TTS）粉末（Cat No：CB010P）置于一幹淨的燒杯中，加入500 ml超純水，徹底攪拌混勻，不要調節pH，即配成500ml 10×TTS緩沖液。超純水稀釋10倍配成1×Tris-Tricine -SDS緩沖液。

注：伯樂Mini III電泳槽一次電泳使用300-350 ml 1×TTS緩沖液。

3.1.2 樣品處理(lǐ)：

        待上樣的檢測樣品與2×Tricine上樣緩沖液（變性，還(hái)原）[Cat No：TP050]等體(tǐ)積混合，95℃處理(lǐ)5分(fēn)鍾後上樣。蛋白(bái)Marker一般已經含有上樣緩沖液，根據說(shuō)明書(shū)上樣（預染Marker不能加熱(rè)處理(lǐ)，非預染Marker上樣前一般要75℃處理(lǐ)5-10分(fēn)鍾）。

3.2 非變性電泳：

3.2.1 10×Tris-Tricine緩沖液配制：

将10×Tris-Tricine緩沖液（10×TT）粉末[Cat No:CB020P]（試劑盒不提供）置于一幹淨的燒杯中，加入500 ml超純水，徹底攪拌混勻，不要調節pH，即配成500 ml 10×TT緩沖液。超純水稀釋10倍配成1×Tris-Tricine緩沖液。

注：伯樂Mini III電泳槽一次電泳使用300-350 ml 1×TT緩沖液。

3.2.2 樣品處理(lǐ)：

      待上樣的檢測樣品與2×Tricine上樣緩沖液（非變性，非還(hái)原）[Cat No:TP070] （試劑盒不提供）等體(tǐ)積混合，不要加熱(rè)，直接上樣。

3.3 電泳：

将電泳槽的内槽加滿電泳緩沖液，輕柔拔出梳子，用1ml移液器将梳孔吹洗幹淨，将Marker或蛋白(bái)樣品加入點樣孔，穩壓電泳（表2），至藍色指示前沿至分(fēn)離(lí)膠下沿位置時即可(kě)停止電泳。整個電泳過程大(dà)約需要2.5-3個小時。

表2 多肽電泳條件(jiàn)