SDS-PAGE凝膠制備試劑盒
|
貨号
|
名稱
|
規格
|
|
RTD6123
|
SDS-PAGE凝膠制備試劑盒
|
50次
|
● 産品組成：
|
貨号
|
名稱
|
規格
|
保存條件(jiàn)
|
|
AC2913-01
|
30%PAA(29:1)
|
100 ml
|
4℃
|
|
TS0588-01
|
1M Tris-HCl pH8.8
|
100 ml
|
RT
|
|
TS0568-15ml
|
1M Tris-HCl pH6.8
|
15 ml
|
RT
|
|
SD050-5ml
|
10% SDS
|
5 ml
|
RT
|
|
AP020P
|
10% APS（幹粉）
|
5 ml
|
RT 配制後-20℃貯存
|
|
TA0761-01
|
TEMED
|
0.5 ml
|
4℃，避光(guāng)
|
|
|
說(shuō)明書(shū)
|
一份
|
|
● 産品簡介：
本公司提供的SDS-PAGE凝膠制備試劑盒包含凝膠制備所需的全部試劑，用戶隻需自(zì)備制膠器具和蒸餾水。本試劑盒不僅可(kě)用于配制SDS-PAGE凝膠，也可(kě)用于配制非變性(Native)PAGE凝膠。本試劑盒可(kě)配制至少30-50塊常規大(dà)小的PAGE膠。
● 貯存、運輸及效期：
按照(zhào)标簽溫度貯存；常溫運輸；有效期一年(nián)。
● 使用說(shuō)明：
一 配制分(fēn)離(lí)膠：
根據目的蛋白(bái)的分(fēn)子量大(dà)小選擇合适的凝膠濃度（表一）。
表一 不同濃度的SDS-PAGE分(fēn)離(lí)膠的最佳分(fēn)離(lí)範圍：
|
SDS-PAGE分(fēn)離(lí)膠濃度
|
最佳分(fēn)離(lí)範圍
|
|
6%
|
50-350kD
|
|
8%
|
35-300kD
|
|
10%
|
20-150kD
|
|
12%
|
15-100kD
|
|
15%
|
10-80kD
|
配制分(fēn)離(lí)膠前，根據以下配方準備10% APS：
10% APS配制-5 ml：将0.5 gAPS幹粉溶于5 ml滅菌水中，徹底溶解後分(fēn)裝，1 ml/支，-20℃備存，每次取一管使用。10% APS應盡量減少室溫存放(fàng)時間，以防失效。10%APS在4℃有效期爲一周，-20℃有效期6個月。若發現凝膠聚合時間延長，應考慮更換使用-20度保存的10% APS。
制備分(fēn)離(lí)膠步驟：
1．參照(zhào)凝膠模具說(shuō)明書(shū)，裝配好凝膠模具。
2．根據表二，将不同體(tǐ)積的成分(fēn)在小燒杯或試管中混合；先後加入TEMED和10%APS，輕輕攪拌使其混勻，避免産生(shēng)氣泡。
3．在凝膠模具中灌入适量分(fēn)離(lí)膠溶液（對于mini-gel，凝膠液加至約距前玻璃闆頂端1.5 cm或距梳齒約0.5 cm即可(kě)），然後在分(fēn)離(lí)膠溶液上輕輕覆蓋一層1-5
cm的水層，使凝膠表面保持平整。
4．靜(jìng)置15-20分(fēn)鍾，待分(fēn)離(lí)膠和水層之間出現一個清晰的界面後，說(shuō)明凝膠已聚合。
注：凝膠的聚合時間與環境溫度有關。夏天溫度較高時，聚合較快(kuài)；冬天氣溫低時，聚合時間會延長。可(kě)以根據環境溫度的不同調節APS的加入量。
表二 SDS-PAGE分(fēn)離(lí)膠配方表
|
組份
|
不同凝膠體(tǐ)積對應各組份的取樣量（ml）
|
|
6％ 膠 5ml 10ml 15ml 20ml
|
|
H2O
|
2.05
|
4.1
|
6.15
|
8.2
|
|
1M Tris-HCl pH8.8
|
1.9
|
3.8
|
5.7
|
7.6
|
|
30％ PAA（29:1）
|
1
|
2
|
3
|
4
|
|
10% SDS
|
0.05
|
0.1
|
0.15
|
0.2
|
|
TEMED
|
0.005
|
0.01
|
0.015
|
0.02
|
|
10％ APS
|
0.05
|
0.1
|
0.15
|
0.2
|
|
8％ 膠 5ml 10ml 15ml 20ml
|
|
H2O
|
1.7
|
3.3
|
5
|
6.7
|
|
1M Tris-HCl pH8.8
|
1.9
|
3.8
|
5.7
|
7.6
|
|
30％ PAA（29:1）
|
1.3
|
2.7
|
4
|
5.3
|
|
10% SDS
|
0.05
|
0.1
|
0.15
|
0.2
|
|
TEMED
|
0.005
|
0.01
|
0.015
|
0.02
|
|
10％ APS
|
0.05
|
0.1
|
0.15
|
0.2
|
|
10％ 膠
5ml 10ml 15ml 20ml
|
|
H2O
|
1.3
|
2.7
|
4
|
5.3
|
|
1M Tris-HCl pH8.8
|
1.9
|
3.8
|
5.7
|
7.6
|
|
30％ PAA（29:1）
|
1.7
|
3.3
|
5
|
6.7
|
|
10% SDS
|
0.05
|
0.1
|
0.15
|
0.2
|
|
TEMED
|
0.005
|
0.01
|
0.015
|
0.02
|
|
10％ APS
|
0.05
|
0.1
|
0.15
|
0.2
|
|
12％ 膠
5ml 10ml 15ml 20ml
|
|
H2O
|
1
|
2
|
3
|
4
|
|
1M Tris-HCl pH8.8
|
1.9
|
3.8
|
5.7
|
7.6
|
|
30％ PAA（29:1）
|
2
|
4
|
6
|
8
|
|
10% SDS
|
0.05
|
0.1
|
0.15
|
0.2
|
|
TEMED
|
0.003
|
0.006
|
0.009
|
0.012
|
|
10％ APS
|
0.05
|
0.1
|
0.15
|
0.2
|
|
15％ 膠
5ml 10ml 15ml 20ml
|
|
H2O
|
0.5
|
1
|
1.5
|
2
|
|
1M Tris-HCl pH8.8
|
1.9
|
3.8
|
5.7
|
7.6
|
|
30％ PAA（29:1）
|
2.5
|
5
|
7.5
|
10
|
|
10% SDS
|
0.05
|
0.1
|
0.15
|
0.2
|
|
TEMED
|
0.003
|
0.006
|
0.009
|
0.012
|
|
10％ APS
|
0.05
|
0.1
|
0.15
|
0.2
|
注：如(rú)果配制非變性膠，參考上述配方，不加10% SDS即可(kě)配制成非變性PAGE膠。
二 濃縮膠制備：
1．去(qù)除覆蓋在分(fēn)離(lí)膠上的水層。
2．按照(zhào)表三将不同成分(fēn)在一個小燒杯或試管中混合；先後加入TEMED和10%過硫酸铵，輕輕攪拌使其混勻，避免産生(shēng)氣泡。
3．将濃縮膠溶液加至分(fēn)離(lí)膠的上面，直至凝膠溶液到達前玻璃闆的頂端。
4．将梳子插入凝膠内，避免産生(shēng)氣泡。
5．靜(jìng)置30-60分(fēn)鍾，等待濃縮膠聚合。
注：凝膠的聚合時間與環境溫度有關。夏天溫度較高時，聚合較快(kuài)；冬天氣溫低時，聚合時間會延長。可(kě)以根據環境溫度的不同調節APS的加入量。
表三 SDS-PAGE濃縮膠(5%)配方表
|
組份
|
不同凝膠體(tǐ)積對應各組份的取樣量（ml）
|
|
2
ml
|
4
ml
|
6
ml
|
10
ml
|
|
H2O
|
1.4
|
2.7
|
4.1
|
6.8
|
|
1M Tris-HCl pH6.8
|
0.25
|
0.5
|
0.75
|
1.25
|
|
30％ PAA（29:1）
|
0.33
|
0.67
|
1
|
1.7
|
|
10% SDS
|
0.02
|
0.04
|
0.06
|
0.1
|
|
TEMED
|
0.002
|
0.004
|
0.006
|
0.01
|
|
10％ APS
|
0.02
|
0.04
|
0.06
|
0.1
|