ECL發光(guāng)Marker
II(22-154 kD)
●産品編号及規格:
RTD6129 20T(100μl)
● 儲存條件(jiàn):
-20℃保存,開封後有效期12個月
● 産品簡介:
ECL發光(guāng)Marker是一種新型可(kě)視的 Western Blot(蛋白(bái)免疫印迹法)蛋白(bái)标準,可(kě)在同一膜上實現與目的蛋白(bái)同時顯示,而無需任何附加步驟和額外的試劑。該産品由8 種高純度的重組蛋白(bái)和2 種預染重組蛋白(bái)組成,指示的蛋白(bái)質分(fēn)子量大(dà)小爲12-154 kD(~12、22、28、38、50、62、~70、78、113、154
kD),其中~70 kD 爲橙紅(hóng)色預染條帶,~12 kD 爲藍色預染條帶,方便動态觀察蛋白(bái)質電泳狀态或判斷蛋白(bái)質轉膜效果。22、28、38、50、62、78、113、154
kD 等8 種重組蛋白(bái)可(kě)以結合幾乎所有類型抗體(tǐ),可(kě)與目的蛋白(bái)質同時結合抗體(tǐ)并經ECL顯色。該産品爲即用型,冰浴融解後即可(kě)使用。
● 使用說(shuō)明:
1.ECL發光(guāng)Marker徹底溶解後,混勻上樣(3-5 μl);
注a:對于使用一抗爲鼠源抗體(tǐ)建議(yì)取本産品5 μl進行蛋白(bái)電泳;對于使用一抗爲兔源抗體(tǐ)可(kě)以降低上樣量至3 μl;建議(yì)初次使用本産品時可(kě)以根據自(zì)身(shēn)的實驗條件(jiàn)和實驗習慣通過預實驗确定合适的上樣量,以獲得(de)效果更佳的實驗圖片;
注b:Marker爲即用型,不能100℃加熱(rè)處理(lǐ),否則會導緻蛋白(bái)條帶發生(shēng)降解或失去(qù)效果
2.待測蛋白(bái)樣品上樣;
3.常規聚丙烯酰胺凝膠電泳;
4.參照(zhào)具體(tǐ)儀器說(shuō)明,将蛋白(bái)轉移至合适的膜上;
5.參照(zhào)目的蛋白(bái)抗體(tǐ)說(shuō)明書(shū),進行膜封閉、一抗孵育、二抗孵育及相(xiàng)應的膜洗滌;
6.化學發光(guāng)檢測,具體(tǐ)方法參照(zhào)相(xiàng)關産品說(shuō)明。
● 問(wèn)題及解決:
ECL發光(guāng) Marker 的使用規範及其使用範圍請(qǐng)詳細閱讀(dú)上文,下表列出了實驗中可(kě)能出現的問(wèn)題及相(xiàng)應的解決方法,敬請(qǐng)參考:
問(wèn)題
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原因
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解決方法
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條帶弱或者沒有條帶
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上樣量偏少
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加大(dà)上樣量
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轉膜不充分(fēn)
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參照(zhào)儀器使用說(shuō)明書(shū),優化轉膜條件(jiàn),或使用蛋白(bái)預染 Maker判斷轉膜效果
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檢測系統所用試劑失效
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确認使用的檢測試劑正常工(gōng)作(zuò),優化一抗、二抗及檢測底物的反應條件(jiàn)(濃度、溫度、時間)
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抗體(tǐ)沒有有效結合 ECL發光(guāng) Marker
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不同來(lái)源的抗體(tǐ)及其亞型與 ECL發光(guāng) Marker的結合效果差異明顯,請(qǐng)根據實驗具體(tǐ)情況加以選擇
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條帶過亮呈彌散狀,甚至無法區分(fēn)條帶
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ECL發光(guāng) Marker上樣量偏多
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減少上樣量
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抗體(tǐ)濃度過高
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降低一抗、二抗使用濃度,優化抗體(tǐ)反應條件(jiàn)
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