非變性PAGE凝膠制備及電泳試劑盒（貨号:RTD6130）

Native PAGE Gel Preparation and Electrophoresis Kit

● 産品組成：

● 産品簡介：

本公司提供的非變性PAGE凝膠制備及電泳試劑盒包含凝膠制備及電泳所需的全部試劑，用戶隻需自(zì)備制膠器具和蒸餾水。本試劑盒可(kě)用于配制非變性(native)PAGE凝膠。本試劑盒可(kě)配制30-50塊常規大(dà)小的非變性PAGE膠。

特别說(shuō)明：由于本系統采用非連續Laemmli凝膠系統，分(fēn)離(lí)膠pH爲8.8，因此要求待分(fēn)離(lí)的蛋白(bái)等電點pI≤7.0，這樣蛋白(bái)在凝膠系統内帶負電荷，在凝膠電泳中才能正常向正極泳動。如(rú)果待分(fēn)離(lí)的蛋白(bái)等電點pI＞7.0，請(qǐng)選擇堿性電泳凝膠系統分(fēn)離(lí)（貨号RTD6131）。

● 使用說(shuō)明：

一 配制分(fēn)離(lí)膠（各試劑使用量請(qǐng)參考表二）

根據目的蛋白(bái)的分(fēn)子量大(dà)小選擇合适的凝膠濃度（表一），再按照(zhào)下面的分(fēn)離(lí)膠配方表（表二）配制非變性PAGE的分(fēn)離(lí)膠(即下層膠)。

表一 不同濃度的PAGE分(fēn)離(lí)膠的最佳分(fēn)離(lí)範圍：

10% APS配制-5 ml：

将0.5 gAPS幹粉溶于5 ml滅菌水中，徹底溶解後分(fēn)裝，1 ml/支，-20℃備存，每次取一管使用。10% APS應盡量減少室溫存放(fàng)時間，以防失效。10%APS在4℃有效期爲一周，-20℃有效期6個月。若發現凝膠聚合時間延長，應考慮更換使用-20度保存的10% APS。

制備分(fēn)離(lí)膠步驟：

1．根據下表，将不同體(tǐ)積的成分(fēn)在小燒杯或試管中混合；先後加入TEMED和10%APS，輕輕攪拌使其混勻，避免産生(shēng)氣泡

2．在凝膠模具中灌入适量分(fēn)離(lí)膠溶液（對于mini-gel，凝膠液加至約距前玻璃闆頂端1.5 cm或距梳齒約0.5 cm即可(kě)），然後在分(fēn)離(lí)膠溶液上輕輕覆蓋一層1-5 cm的水層，使凝膠表面保持平整。

3．靜(jìng)置15-20分(fēn)鍾，待分(fēn)離(lí)膠和水層之間出現一個清晰的界面後，說(shuō)明凝膠已聚合。

注：凝膠的聚合時間與環境溫度有關。夏天溫度較高時，聚合較快(kuài)；冬天氣溫低時，聚合時間會延長。可(kě)以根據環境溫度的不同調節APS的加入量。

1．去(qù)除覆蓋在分(fēn)離(lí)膠上的水層。

2．按照(zhào)表一将不同成分(fēn)在一個小燒杯或試管中混合；先後加入TEMED和10%過硫酸铵，輕輕攪拌使其混勻，避免産生(shēng)氣泡。

3．将濃縮膠溶液加至分(fēn)離(lí)膠的上面，直至凝膠溶液到達前玻璃闆的頂端。

4．将梳子插入凝膠内，避免産生(shēng)氣泡。

5．靜(jìng)置30-60分(fēn)鍾，等待濃縮膠聚合。

注：凝膠的聚合時間與環境溫度有關。夏天溫度較高時，聚合較快(kuài)；冬天氣溫低時，聚合時間會延長。可(kě)以根據環境溫度的不同調節APS的加入量。

三 電泳：

凝膠凝固好後，根據以下配方準備電泳緩沖液。

5×Tris-甘氨酸電泳緩沖液（不含SDS）的配制-1 L：将一包5×Tris-甘氨酸電泳緩沖液幹粉全部倒入1L燒杯中，加入約900 ml水徹底溶解，用水定容至1 L，即配成5×Tris-甘氨酸電泳緩沖液（此溶液不用調節pH值）。用前再稀釋5倍即配成1×Tris-甘氨酸電泳緩沖液。

在電泳槽的内槽内加入1×Tris-甘氨酸電泳緩沖液(讓電泳緩沖液漫過加樣孔)，輕輕的撥出梳子，随後在電泳槽外槽加入适量的1×Tris-甘氨酸電泳緩沖液。上樣，電泳，一般是濃縮膠80V，分(fēn)離(lí)膠120V恒壓，等指示前沿溴酚蘭電泳到分(fēn)離(lí)膠下緣後，結束電泳，染色或者進行下一步實驗。

實驗示例

非變性蛋白(bái)電泳相(xiàng)關産品發表文章(zhāng)

1. [2021 IF=3.74] Cloning, expression, and function of ferritins in the tick Haemaphysalis flava.

Product: RTD6142 高分(fēn)子量非變性電泳蛋白(bái)質Marker II（45-669 kD）

Author: Yu Zhao, Lei Liu, Jin-Bao Liu, Cong-Ying Wu, De-Yong Duan, Tian-Yin Cheng

Journal: Ticks and Tick-borne Diseases. Volume 13, Issue 2, March 2022, 101892

Institution：College of Veterinary Medicine, Hunan Agricultural University,

Paper link：https://linkinghub.elsevier.com/retrieve/pii/S1877959X21002454

2. [2021 IF=6.95] Characterizing of a new α-agarase AgaE from Thalassomonas sp. LD5 and probing its catalytically essential residues.

Product: RTD6142 高分(fēn)子量非變性電泳蛋白(bái)質Marker II（45-669 kD）

Author: Jingnan Xua, Zibo Cuia, Weibin Zhanga, Jingxuan Lua, Xinzhi Lua, Wengong Yu.

Journal: International Journal of Biological Macromolecules. Vol 194,2022,50-57.

Institution： School of Medicine and Pharmacy, Ocean University of China

Paper link：https://doi.org/10.1016/j.ijbiomac.2021.11.194

3. [2021 IF=6.95] A teleost interleukin-16 is implicated in peripheral blood leukocytes recruitment and anti-bacterial immunity.

Product: RTD6130 非變性PAGE凝膠制備及電泳試劑盒

Author:Xue-peng Li, Guan-yu Chen, Jian Zhang, Deng-lai Li, Ji-xing Feng.

Journal: International Journal of Biological Macromolecules. 2021,Vol.187, 821-829.

Institution： School of Ocean, Yantai University, Yantai, China

Paper link：https://doi.org/10.1016/j.ijbiomac.2021.07.151

4. [IF=17.69 2021] Turn air-captured CO2 with methanol into amino acid and pyruvate in an ATP/NAD(P)H- free chemoenzymatic system.

Product: RTD6130 非變性PAGE凝膠制備及電泳試劑盒; PL111 5×非變性非還(hái)原蛋白(bái)上樣緩沖液; RTD6142 高分(fēn)子量非變性電泳蛋白(bái)質Marker II（45-669 kD）

Author: Jianming Liu, Han Zhang, Yingying Xu, HaoMeng, An-Ping Zeng.

Journal: Nature Communications. 2023，14:2772.

Institution： Westlake University

Paper link： http://www.nature.com/articles/s41467-023-38490-w