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堿性蛋白(bái)非變性PAGE凝膠制備及電泳試劑盒

堿性蛋白(bái)非變性PAGE凝膠制備及電泳試劑盒

産品編号:RTD6131

産品規格:50次

數量
價格 ¥500

堿性蛋白(bái)非變性PAGE凝膠制備及電泳試劑盒    

Basic Protein Native PAGE Gel Preparation and Electrophoresis Kit

貨号

名稱

規格

RTD6131

堿性蛋白(bái)非變性PAGE凝膠制備及電泳試劑盒

50

産品組成:

序号

貨号

名稱

規格

保存條件(jiàn)

1

AC2913-01

30%PAA(29:1)

100 ml

4,避光(guāng)

2

RTD6131-02

4×堿性蛋白(bái)分(fēn)離(lí)膠緩沖液 pH4.3

100 ml

4

3

RTD6131-03

4×堿性蛋白(bái)濃縮膠緩沖液 pH6.8

50 ml

4

4

RTD6131-04

100×分(fēn)離(lí)膠促凝劑

2.5 ml

-20

5

AP020P

APS(幹粉)

5 ml

RT

6

TA0761-01

TEMED

0.5 ml

4,避光(guāng)

7

PL110

甲基綠上樣緩沖液

1 ml

-20

8

TG160P

堿性蛋白(bái)電泳緩沖液(幹粉)

1 L

RT

産品簡介:

本公司提供的試劑盒包含堿性蛋白(bái)凝膠制備及電泳所需的全部試劑,用戶隻需自(zì)備制膠器具和蒸餾水。本試劑盒可(kě)用于配制堿性蛋白(bái)非變性(native)PAGE凝膠。本試劑盒可(kě)配制30-50塊常規大(dà)小的非變性PAGE膠。

各種蛋白(bái)質分(fēn)子由于所含的堿性氨基酸和酸性氨基酸的數目不同,因而有各自(zì)的等電點。凡堿性氨基酸含量較多的蛋白(bái)質稱爲堿性蛋白(bái)質,等電點偏堿性,如(rú)組蛋白(bái)、精蛋白(bái)等。反之,凡酸性氨基酸含量較多的蛋白(bái)質,等電點就(jiù)偏酸性。分(fēn)離(lí)堿性蛋白(bái)時候,要利用低 pH 凝膠系統,分(fēn)離(lí)酸性蛋白(bái)時候,要利用高 pH 凝膠系統。酸性蛋白(bái)通常在非變性凝膠電泳中采用的 pH 是 8.8的緩沖系統,蛋白(bái)會帶負電荷,蛋白(bái)會相(xiàng)陽極移動;而堿性蛋白(bái)通常電泳是在微酸性環境下進行,蛋白(bái)帶正電荷,這時候需要将陰極和陽極倒置才可(kě)以電泳。

特别說(shuō)明:

1. 由于本系統采用非連續凝膠系統,分(fēn)離(lí)膠pH爲4.3,因此要求待分(fēn)離(lí)的蛋白(bái)等電點pI>7.0,這樣堿性蛋白(bái)在酸性凝膠系統内帶正電荷,在凝膠電泳中才能正常向陰極泳動。如(rú)果待分(fēn)離(lí)的蛋白(bái)等電點pI<7.0,請(qǐng)選擇非連續Laemmli活性凝膠系統分(fēn)離(lí)(貨号:RTD6130)。

2. 本試劑盒不适用于總蛋白(bái)樣品的電泳,也不适用于總蛋白(bái)分(fēn)離(lí)後的Wstern Blot檢測;推薦應用于純化後蛋白(bái)的堿性蛋白(bái)電泳。

保存及運輸:

   按照(zhào)标簽溫度貯存;常溫運輸;開封後一年(nián)有效。

使用說(shuō)明:

配制分(fēn)離(lí)膠

根據目的蛋白(bái)的分(fēn)子量大(dà)小選擇合适的凝膠濃度(表一),配制非變性PAGE的分(fēn)離(lí)膠。

表一 不同濃度的PAGE分(fēn)離(lí)膠的最佳分(fēn)離(lí)範圍

PAGE分(fēn)離(lí)膠濃度

最佳分(fēn)離(lí)範圍

6%

50-150kD

8%

30-90kD

10%

20-80kD

12%

12-60kD

15%

10-40kD

配制分(fēn)離(lí)膠前,根據以下配方準備10% APS:

10% APS配制-5 ml

将0.5 gAPS幹粉溶于5 ml滅菌水中,徹底溶解後分(fēn)裝,1 ml/支,-20℃備存,每次取一管使用。10% APS應盡量減少室溫存放(fàng)時間,以防失效。10%APS在4℃有效期爲一周,-20℃有效期6個月。若發現凝膠聚合時間延長,應考慮更換使用-20度保存的10% APS。

制備分(fēn)離(lí)膠步驟:

1.根據下表,将不同體(tǐ)積的成分(fēn)在小燒杯或試管中混合,輕輕攪拌使其混勻,避免産生(shēng)氣泡

2.在凝膠模具中灌入适量分(fēn)離(lí)膠溶液(對于mini-gel,凝膠液加至約距前玻璃闆頂端1.5 cm或距梳齒約0.5 cm即可(kě)),然後在分(fēn)離(lí)膠溶液上輕輕覆蓋一層1-5 cm的水層,使凝膠表面保持平整。

3.靜(jìng)置15-30分(fēn)鍾,待分(fēn)離(lí)膠和水層之間出現一個清晰的界面後,說(shuō)明凝膠已聚合。

注:凝膠的聚合時間與環境溫度有關。夏天溫度較高時,聚合較快(kuài);冬天氣溫低時,聚合時間會延長。可(kě)以根據環境溫度的不同調節APS的加入量。

表二 配制不同濃度分(fēn)離(lí)膠所需各組分(fēn)的體(tǐ)積(毫升)

組份

6% 分(fēn)離(lí)膠

5 ml

8% 分(fēn)離(lí)膠

5 ml

10% 分(fēn)離(lí)膠

5 ml

12% 分(fēn)離(lí)膠

5 ml

15% 分(fēn)離(lí)膠

5 ml

滅菌水

2.7

2.4

2

1.7

1.2

4×分(fēn)離(lí)膠緩沖液 pH4.3

1.25

1.25

1.25

1.25

1.25

30 PAA29:1

1

1.3

1.7

2

2.5

100×分(fēn)離(lí)膠促凝劑

0.05

0.05

0.05

0.05

0.05

TEMED

0.005

0.005

0.005

0.005

0.005

10 APS

0.05

0.05

0.05

0.05

0.05

濃縮膠制備:

1.去(qù)除覆蓋在分(fēn)離(lí)膠上的水層。

2.按照(zhào)表三将不同成分(fēn)在一個小燒杯或試管中混合,輕輕攪拌使其混勻,避免産生(shēng)氣泡。

3.将濃縮膠溶液加至分(fēn)離(lí)膠的上面,直至凝膠溶液到達前玻璃闆的頂端。

4.将梳子插入凝膠内,避免産生(shēng)氣泡。

5.靜(jìng)置30-60分(fēn)鍾,等待濃縮膠聚合。注:凝膠的聚合時間與環境溫度有關。夏天溫度較高時,聚合較快(kuài);冬天氣溫低時,聚合時間會延長。可(kě)以根據環境溫度的不同調節APS的加入量。

表三 堿性蛋白(bái)Native PAGE濃縮膠(5%)配方表

組份

5%濃縮膠(2 ml

H2O

1.15

4×堿性蛋白(bái)濃縮膠緩沖液 pH6.8

0.5

30 PAA29:1

0.33

TEMED

0.002

10 APS

0.02

電泳:

凝膠凝固好後,根據以下配方準備電泳緩沖液。

堿性蛋白(bái)電泳緩沖液的配制-1 L:将5×堿性蛋白(bái)電泳緩沖液幹粉全部倒入1L燒杯中,加入約900 ml水徹底溶解,加入冰醋酸11ml,用水定容至1 L,即配成5×堿性蛋白(bái)電泳緩沖液(此溶液pH值約爲4.4)。

将5×堿性蛋白(bái)電泳緩沖液稀釋5倍即配成1×堿性蛋白(bái)電泳緩沖液。在電泳槽的内槽内加入1×堿性蛋白(bái)電泳緩沖液(讓電泳緩沖液漫過加樣孔),輕輕的撥出梳子,沖洗加樣孔,随後在電泳槽外槽加入适量的1×堿性蛋白(bái)電泳緩沖液。上樣,把電泳電源的電源線互換,即紅(hóng)色的陽極電極查到陰極孔,黑(hēi)色的陰極電極插到陽極孔,按照(zhào)表四條件(jiàn),電泳,等指示前沿甲基綠電泳到分(fēn)離(lí)膠下緣後,結束電泳,染色或者進行下一步實驗。   

表四 堿性蛋白(bái)電泳條件(jiàn)

恒電壓

150V

起始電流

30-40mA/闆膠

結束電流

10-20mA/闆膠

電泳時間

40-45分(fēn)鍾



實驗示例:






 
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