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RealPAGE plus彩色凝膠快(kuài)速制備試劑盒 8%

RealPAGE plus彩色凝膠快(kuài)速制備試劑盒 8%

産品編号:RTD6132-08

産品規格:8%

相(xiàng)關規格:
數量
價格 ¥300

RealPAGE plus彩色凝膠快(kuài)速制備試劑盒

 RealPAGE plus Colour Gel Fast Preparation Kit

●  貨品規格:

貨号

說(shuō)明

制膠數量

RTD6132-06

制備6%PAGE

125 0.75mm

901 mm

601.5 mm

RTD6132-08

制備8%PAGE

RTD6132-10

制備10%PAGE

RTD6132-12

制備12%PAGE

RTD6132-15

制備15%PAGE

●  貨品内容:

組份

貨号

名稱

規格

保存

1

RTD6132-UA

上層膠溶液A

80 ml

4

2

RTD6132-UB

彩色上層膠溶液B

80 ml

4

3

RTD6132-LA06

下層膠溶液A 6%

250 ml

4

RTD6132-LA08

下層膠溶液A 8%

250 ml

4

RTD6132-LA10

下層膠溶液A 10%

250 ml

4

RTD6132-LA12

下層膠溶液A 12%

250 ml

4

RTD6132-LA15

下層膠溶液A 15%

250 ml

4

4

RTD6132-LB

下層膠溶液B

250 ml

4

5

RTD6132-SP

改良型促凝劑

8 ml

4℃,配制後-20℃貯存

說(shuō)明書(shū)

一份

● 産品簡介:

該産品利用聚丙烯酰胺凝膠電泳原理(lǐ),采用合理(lǐ)設計(jì)的預混合配方和配制流程,可(kě)在50分(fēn)鍾内配制得(de)到高質量的聚丙烯酰胺凝膠,用于變性和非變性蛋白(bái)凝膠電泳。本産品可(kě)以配制常用分(fēn)離(lí)膠濃度6%、8%、10%、12%和15%,可(kě)以滿足絕大(dà)多數蛋白(bái)電泳需求。

本試劑盒大(dà)約可(kě)以配制60-125塊常規大(dà)小(8×10cm)PAGE凝膠,具體(tǐ)數量根據凝膠厚度決定:0.75mm厚度凝膠可(kě)以配制125塊膠,1mm厚度凝膠可(kě)以配制至少90塊膠,1.5mm厚度凝膠可(kě)以配制至少60塊膠。

● 運輸和貯存:

本産品常溫運輸;組份按照(zhào)标簽溫度貯存;有效期一年(nián)。

● 特點:

1. 方便:彩色上層膠,方便上樣;上層膠和下層膠溶液1:1混合,無需計(jì)算;

2. 安全:不用接觸有毒粉末;不用單獨添加TEMED;

3. 兼容性廣:制膠溶液中不含SDS,可(kě)用于非變性電泳(Native-PAGE);

● 使用說(shuō)明:

  凝膠制備:

1.1參照(zhào)凝膠模具說(shuō)明書(shū),裝配好凝膠模具。

1.2 根據下表參考選擇合适的凝膠濃度

表一不同濃度的PAGE下層膠的最佳分(fēn)離(lí)範圍

下層膠(分(fēn)離(lí)膠)濃度

最佳分(fēn)離(lí)範圍

6%

50-350 kD

8%

35-300 kD

10%

20-150 kD

12%

15-100 kD

15%

10-80 kD










1.3 根據下表配制凝膠:

表二 凝膠配制表

下層膠配方

上層膠配方

膠厚度

下層膠溶液B

下層膠溶液A

改良型促凝劑

膠厚度

彩色上層膠溶液B

上層膠溶液A

改良型促凝劑

0.75 mm

2 ml

2 ml

40 μl

0.75 mm

0.5 ml

0.5 ml

10 μl

1.0 mm

2.5 ml

2.5 ml

50 μl

1.0 mm

0.75 ml

0.75 ml

15 μl

1.5 mm

4 ml

4 ml

80 μl

1.5 mm

1 ml

1 ml

20 μl

1.3.1 取等體(tǐ)積下層膠溶液B 和下層膠溶液A ,各 2.0/2.5/4.0 ml,混勻;

1.3.2混合溶液中加入 40/50/80 μl的改良型促凝劑,輕輕混勻,将混勻後的溶液注入制膠玻璃闆中,使液面和短(duǎn)玻璃闆上沿之間的距離(lí)比梳齒長0.5 cm即可(kě);

注意:此溶液爲過量,請(qǐng)勿全部注入。

1.3.3 沿玻璃闆緩慢(màn)加入适量滅菌水或無水乙醇覆蓋于下層膠之上,待下層膠凝固後,倒去(qù)上層水或乙醇;

注意:當水(乙醇)和膠之間有一條折射線時,說(shuō)明膠已凝固;25℃5-10分(fēn)鍾可(kě)以聚合。

1.3.4 取等體(tǐ)積彩色上層膠溶液B和上層膠溶液A ,各 0.5/0.75/1.0 ml,混勻;

1.3.5向混合溶液中加入 10/15/20 μl 的改良型促凝劑,輕輕混勻,插入梳齒;

1.3.6 待上層膠凝固後 (約20-40 min),拔去(qù)梳齒即可(kě)用于電泳。

注:凝膠的聚合時間與環境溫度有關。夏天溫度較高時,聚合較快(kuài);冬天氣溫低時,聚合時間會延長。

上層膠25℃ 20-25分(fēn)鍾可(kě)以聚合;18℃ 35-40分(fēn)鍾可(kě)以聚合。

  電泳:

2.1 SDS-PAGE變性電泳:

2.1.1電泳緩沖液配制:

将5×Tris-甘氨酸-SDS電泳緩沖液幹粉(自(zì)備,組份0.96 M 甘氨酸,0.125 M Tris,0.5% SDS)全部倒入1L燒杯中,加入約900 ml水徹底溶解,用水定容至1 L,即配成5×Tris-甘氨酸電泳緩沖液(此溶液不用調節pH值)。用前再稀釋5倍即配成1×Tris-甘氨酸-SDS電泳緩沖液。

2.1.2 樣品處理(lǐ):融化-混合-變性-上樣

5×MonoColor蛋白(bái)上樣緩沖液常溫數分(fēn)鍾解凍後輕輕搖勻,以确保溶液混合均勻;将緩沖液與蛋白(bái)樣品按照(zhào)1:4的比例混勻,如(rú)8 μl樣品加入2 μl 5×上樣緩沖液;将蛋白(bái)樣品置于95℃中加熱(rè)5-10分(fēn)鍾;蛋白(bái)樣品加入凝膠加樣孔内電泳。

2.1.3 電泳過程;

在電泳槽的内槽内加入1×Tris-甘氨酸-SDS電泳緩沖液(讓電泳緩沖液漫過加樣孔),輕輕的撥出梳子,用1ml吸頭徹底沖洗加樣孔,随後在電泳槽外槽加入适量的1×Tris-甘氨酸-SDS電泳緩沖液。

表三 SDS-PAGE電泳條件(jiàn)

恒電壓

起始電流(一闆膠)

結束電流(一闆膠)

電泳時間

适用條件(jiàn)

150V

35-40 mA

15-20 mA

55 + min

最佳電壓,最優的分(fēn)辨率

200V

45-55 mA

20-25 mA

45+ min

節省時間

225V

40-50 mA

15-20 mA

35+ min

250V

65-75 mA

20-25 mA

30+ min

300V

70-80 mA

25-35mA

25+ min

最省時間

2.2 非變性電泳(Native PAGE):

2.2.1電泳緩沖液配制:

将5×Tris-甘氨酸電泳緩沖液幹粉(自(zì)備,組份0.96 M 甘氨酸,0.125 M Tris)全部倒入1L燒杯中,加入約900 ml水徹底溶解,用水定容至1 L,即配成5×Tris-甘氨酸電泳緩沖液(此溶液不用調節pH值)。用前再稀釋5倍即配成1×Tris-甘氨酸-SDS電泳緩沖液。

2.2.2 樣品處理(lǐ):融化-混合-上樣

5×非變性非還(hái)原蛋白(bái)上樣緩沖液常溫數分(fēn)鍾解凍後輕輕搖勻,以确保溶液混合均勻;将緩沖液與蛋白(bái)樣品按照(zhào)1:4的比例混勻,如(rú)8 μl樣品加入2 μl 5×上樣緩沖液;蛋白(bái)樣品加入凝膠加樣孔内電泳。注:非變性電泳樣品不能加熱(rè)處理(lǐ)。

2.2.3 電泳過程;

在電泳槽的内槽内加入1×Tris-甘氨酸電泳緩沖液(讓電泳緩沖液漫過加樣孔),輕輕的撥出梳子,用1ml吸頭徹底沖洗加樣孔,随後在電泳槽外槽加入适量的1×Tris-甘氨酸電泳緩沖液。

 

 

表四 Native PAGE電泳條件(jiàn)

 

恒電壓

起始電流

結束電流

電泳時間

适用條件(jiàn)

推薦電壓

150V

25-35/闆膠

5-10 mA/闆膠

60 + min

最佳電壓,最優的分(fēn)辨率

染色:

1. 将電泳後的PAGE膠取下放(fàng)入塑料容器中,加入适量FastBlue蛋白(bái)染色液或常規考馬斯亮藍染色液(以剛剛覆蓋過膠面爲适),條帶1-2分(fēn)鍾即可(kě)見(jiàn)。

2. 搖床常溫搖動10-15分(fēn)鍾至條帶清晰可(kě)見(jiàn)。

3. 加入适量蒸餾水脫色,期間更換1-2次蒸餾水,搖床常溫搖動10-15分(fēn)鍾至背景幹淨。

4. 觀察保存結果。


實驗示例:


 
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