非變性凝膠蛋白(bái)電泳試劑盒（含預制膠）
Native PAGE Gel Protein Electrophoresis Kit
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貨号
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名稱
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規格
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RTD6135
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非變性凝膠蛋白(bái)電泳試劑盒
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10次
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● 産品組成：
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貨号
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名稱
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規格
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貯存
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RTD6117-0415
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RealPAGE Tris-Gly預制膠4-15%
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10闆
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4℃
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PL111
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5×非變性非還(hái)原蛋白(bái)上樣緩沖液
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1 ml
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-20℃
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TG130P
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5×Tris-甘氨酸電泳緩沖液（粉末型）
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1 L
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RT
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RTD6202-02
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FastBlue蛋白(bái)染色液
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500 ml
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4℃
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● 運輸和貯存：
本産品常溫運輸；組份按照(zhào)标簽溫度貯存；有效期一年(nián)。
● 産品簡介：
本公司提供的非變性凝膠蛋白(bái)電泳試劑盒包含非變性電泳所需的全部試劑，用戶隻需自(zì)備蛋白(bái)電泳設備。試劑盒配套有預制膠，不需要自(zì)己制備凝膠，方便使用。另外，試劑盒提供蛋白(bái)上樣緩沖液，電泳緩沖液以及染色液，可(kě)以方便完成蛋白(bái)樣品從(cóng)上樣到最後染色的全部過程。
試劑盒配套的預制膠爲梯度凝膠，濃度爲4-15%，可(kě)以有效分(fēn)離(lí)30-1000 kD蛋白(bái)。
本試劑盒可(kě)以進行10次非變性電泳。配套的預制膠厚度爲1.1 mm，12齒，每個泳道可(kě)以上樣最大(dà)30 μl樣品。
特别說(shuō)明：由于本系統采用非連續Laemmli凝膠系統（Tris-Glycine系統），電泳凝膠系統pH在8.3-8.8，因此要求待分(fēn)離(lí)的蛋白(bái)等電點pI≤8.0（酸性蛋白(bái)），這樣蛋白(bái)在凝膠系統内帶負電荷，pI越低于8.0，帶更多的負電荷，在凝膠電泳中才能正常向正極泳動。如(rú)果待分(fēn)離(lí)的蛋白(bái)等電點pI＞8.0（堿性蛋白(bái)），請(qǐng)選擇堿性電泳凝膠系統分(fēn)離(lí)（貨号RTD6131）。
● 使用說(shuō)明：
1. 樣品制備：
該試劑盒不含樣品制備的相(xiàng)關試劑，請(qǐng)根據參考文獻自(zì)行制備非變性蛋白(bái)樣品。
注：非變性樣品制備中注意不用使用任何變性劑如(rú)SDS，LDS以及還(hái)原型如(rú)DTT，BME，TCEP等，以防止蛋白(bái)變性。非變性樣品的電泳對鹽離(lí)子濃度高度敏感，樣品電泳時盡量把鹽離(lí)子濃度控制在100 mM以内，過高的鹽離(lí)子濃度導緻電泳拖尾，條帶不能有效分(fēn)離(lí)。
2. 電泳：
2.1 拆開預制膠包裝，将預制膠安裝在合适的電泳槽中。
注：伯樂Mini III或Mini-PROTEAN Tetra Cell，天能VE-180，六一24K系列電泳槽請(qǐng)确保密封條的安裝方向（下圖）。
六一其他(tā)系列，君意東方JY-SCZ2/4，百晶BG-verMINI等電泳槽可(kě)以直接使用預制膠。
不兼容Thermol系列電泳槽。
2.2 準備電泳緩沖液：
将5×Tris-甘氨酸電泳緩沖液（粉末型）溶于1 L超純水中，徹底溶解，測定pH應爲8.3-8.5左右，不要調節pH。用前稀釋5倍即配成1×即用型Tris-甘氨酸電泳緩沖液。
2.3準備上樣樣品：
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總體(tǐ)積
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10
μl
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蛋白(bái)樣品
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x μl
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5×非變性非還(hái)原蛋白(bái)上樣緩沖液
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2 μl
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超純水
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補至10 μl
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不要加熱(rè)
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2.4電泳過程；
在電泳槽的内槽内加入1×Tris-甘氨酸電泳緩沖液(讓電泳緩沖液漫過加樣孔)，輕輕的撥出梳子，用1ml吸頭沖洗加樣孔3次；随後在電泳槽外槽加入适量的1×Tris-甘氨酸電泳緩沖液。上樣，電泳。
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Native-PAGE電泳
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恒電壓
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起始電流
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結束電流
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電泳時間
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150V
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/闆膠
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/闆膠
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min
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注：冰浴電泳（可(kě)選）
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3. 染色：
3.1 将電泳後的PAGE膠取下放(fàng)入塑料容器中，加入适量FastBlue蛋白(bái)染色液（以剛剛覆蓋過膠面爲适），搖床常溫搖動，條帶5-10分(fēn)鍾即可(kě)見(jiàn)（蛋白(bái)含量高于1
μg條帶）。
3.2 搖床常溫繼續搖動15-30分(fēn)鍾至條帶清晰可(kě)見(jiàn)。
3.3 加入适量蒸餾水脫色，期間更換1-2次蒸餾水，搖床常溫搖動10-15分(fēn)鍾至背景幹淨。
3.4 觀察保存結果。
4. 轉膜：
5. 實驗示例:
RTD6117-0415 4-15% RealPAGE Precast Gel
150V 35-11mA 67min
1×Tris-甘氨酸電泳緩沖液
FastBlue蛋白(bái)快(kuài)速染色染色15分(fēn)鍾