RealPAGE Native BN/CN 預制膠(U型闆，通用型，12孔)
RealPAGE Native BN/CN Precast Gels(U Type Plate,Universal,12 Wells)
● 貨品規格：
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貨号
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名稱
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分(fēn)離(lí)範圍
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規格
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保存
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RTD6138-0312
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3-12% RealPAGE Native BN/CN 預制膠
(U型闆，通用型，12 孔)
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30-10000 kD
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10闆
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4℃
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RTD6138-0416
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4-16% RealPAGE Native BN/CN 預制膠
(U型闆，通用型，12 孔)
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15-1000 kD
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10闆
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4℃
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● 産品簡介：
Blue/Clear Native PAGE（BN/CN-PAGE）是一種從(cóng)生(shēng)物樣品（質膜，胞漿等）中分(fēn)離(lí)分(fēn)子量10 kD-10000 kD 範圍的蛋白(bái)質複合物的電泳技術(shù)。其原理(lǐ)是用溫和去(qù)污劑(如(rú) DDM，digitonin)将蛋白(bái)複合體(tǐ)從(cóng)細胞膜中以近似天然的狀态分(fēn)離(lí)出來(lái)，Blue Native PAGE （BN-PAGE）是用考馬斯亮藍 G-250 代替 SDS與蛋白(bái)結合而使其帶負電荷，根據蛋白(bái)分(fēn)子量不同在 PAGE膠中得(de)到分(fēn)離(lí)；Clear Native PAGE（CN-PAGE）是電泳緩沖液中不加入任何染料，電泳中始終保持蛋白(bái)的天然電荷和活性狀态，然而，其蛋白(bái)的分(fēn)辨率要低于Blue Native PAGE。另外，BN-PAGE由于考馬斯亮藍G-250存在，使蛋白(bái)都(dōu)覆蓋上負電荷，可(kě)以分(fēn)離(lí)堿性蛋白(bái)（pI＞7）；而CN-PAGE隻适合于酸性蛋白(bái)（pI＜7）的分(fēn)離(lí)。
本産品可(kě)以用于分(fēn)離(lí)分(fēn)子量在 10 kD-10000 kD 的蛋白(bái)複合體(tǐ)，樣品可(kě)以來(lái)于胞漿、細胞總裂解液、細胞膜、線粒體(tǐ)膜和葉綠體(tǐ)膜等。電泳後可(kě)直接用于考染、銀染、Western 雜交、SDS-PAGE電泳、蛋白(bái)純化、蛋白(bái)活性檢測等分(fēn)析實驗，也可(kě)直接用于電洗脫制備蛋白(bái)。
● 運輸和貯存：
本産品常溫運輸；凝膠4-8℃貯存，不要冷(lěng)凍；有效期12個月。
● 使用說(shuō)明：
1. 樣品制備：
該産品不含樣品制備的相(xiàng)關試劑，根據樣品種類選擇不同提取方法。植物類囊體(tǐ)BN樣品制備可(kě)以選擇植物類囊體(tǐ)膜提取試劑盒（貨号:RTU5002）；動物總蛋白(bái)BN樣品制備可(kě)以選擇
動物胞漿活性蛋白(bái)提取試劑盒(貨号:RTD8106)；動物膜蛋白(bái)BN樣品制備可(kě)以選擇動物膜蛋白(bái)提取試劑盒（貨号:RTD8111,RTD8112）；動物線粒體(tǐ)BN樣品制備可(kě)以選擇動物線粒體(tǐ)提取試劑盒（貨号:RTD8115和RTD8116)。
2. 電泳：
2.1 拆開預制膠包裝，将預制膠安裝在合适的電泳槽中。
注：伯樂Mini III或Mini-PROTEAN Tetra Cell，天能VE-180，六一24K系列電泳槽請(qǐng)确保密封條的安裝方向（下圖）。
六一其他(tā)系列，君意東方JY-SCZ2/4，百晶BG-verMINI等電泳槽可(kě)以直接使用預制膠。
不兼容Thermol系列電泳槽。
2.2 準備電泳緩沖液：
将10×BN/CN PAGE電泳緩沖液（幹粉）溶于500 ml滅菌水中，徹底溶解，測定pH應爲7.0左右，不要調節pH。用前稀釋10倍即配成1×BN/CN PAGE電泳緩沖液。
2.2.1 CN-PAGE電泳：
陽極緩沖液和陰極緩沖液均直接使用1×BN/CN PAGE電泳緩沖液進行電泳。
2.2.2 BN-PAGE電泳：
陽極緩沖液使用1×BN/CN PAGE電泳緩沖液，陰極緩沖液按照(zhào)下表配制：
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1×藍色陰極緩沖液
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150 ml
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10×BN/CN PAGE電泳緩沖液
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15 ml
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2% G-250 染料（電泳用）
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1.5 ml
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超純水
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定容至150 ml
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2.3準備樣品：
2.3.1 CN-PAGE電泳：
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總體(tǐ)積
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10 μl
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蛋白(bái)樣品
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x μl
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4×BN/CN-PAGE蛋白(bái)上樣緩沖液
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2.5 μl
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超純水
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補至10 μl
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不要加熱(rè)
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2.3.2 BN-PAGE電泳：
2.3.2.1 植物類囊體(tǐ)膜蛋白(bái)電泳：
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總體(tǐ)積
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10
μl
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含去(qù)垢劑樣品*
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植物類囊體(tǐ)膜蛋白(bái)樣品
（2%DDM增溶）
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x μl
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4×BN/CN-PAGE蛋白(bái)上樣緩沖液
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2.5 μl
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5%
G-250染料（蛋白(bái)上樣）
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1 μl
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超純水
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補至10 μl
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不要加熱(rè)
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*植物類囊體(tǐ)膜蛋白(bái)電泳中，含去(qù)垢劑樣品中染料加入按照(zhào)以下原則：
植物類囊體(tǐ)樣品中G250終濃度爲去(qù)垢劑終濃度的1/4。例如(rú)樣品中DDM（n-Dodecyl β-D-maltoside，β-DM， n-十二烷基-β-D-麥芽糖苷）終濃度爲2%，則需要G-250終濃度爲0.5%。10 μl蛋白(bái)樣品中需要加5%
G-250染料1 μl。
2.3.2.2 動物線粒體(tǐ)BN樣品電泳：
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總體(tǐ)積
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10
μl
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含去(qù)垢劑樣品*
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動物線粒體(tǐ)BN樣品
（1%DDM增溶）
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x μl
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4×BN/CN-PAGE蛋白(bái)上樣緩沖液
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2.5 μl
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5%
G-250染料（蛋白(bái)上樣）
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0.25 μl
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超純水
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補至10 μl
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不要加熱(rè)
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*動物線粒體(tǐ)BN樣品電泳中，含去(qù)垢劑樣品中染料加入按照(zhào)以下原則：
動物線粒體(tǐ)BN樣品中G250終濃度爲去(qù)垢劑終濃度的1/8。例如(rú)樣品中DDM終濃度爲1%，則需要G-250終濃度爲0.125%。10
μl蛋白(bái)樣品中需要加5% G-250染料0.25
μl。
2.4電泳過程；
2.4.1 CN-PAGE電泳：
電泳内外槽均使用1×BN/CN PAGE電泳緩沖液。在電泳槽的内槽内加入1×BN/CN PAGE電泳緩沖液(讓電泳緩沖液漫過加樣孔)，輕輕撥出預制膠梳子，用1ml吸頭沖洗加樣孔3次，随後在電泳槽外槽加入适量的1×BN/CN PAGE電泳緩沖液。
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CN-PAGE電泳
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恒電壓
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起始電流
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結束電流
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電泳時間
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120V
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10-15mA/闆膠
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4-10mA/闆膠
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50+min
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注：冰浴電泳
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2.4.2 BN-PAGE電泳：
BN-PAGE電泳外槽使用1×BN/CN電泳緩沖液；内槽開始電泳使用的是1×藍色陰極緩沖液，冰浴電泳，等待電泳指示前沿到達凝膠1/3處時，将電泳緩沖液更換爲1×BN/CN電泳緩沖液，繼續後續電泳，因爲過多染料會影(yǐng)響蛋白(bái)在凝膠中的遷移以及蛋白(bái)後續的轉膜實驗。
BN-PAGE電泳條件(jiàn)（一闆膠）
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恒電壓
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起始電流
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電泳時間
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緩沖液
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120 V
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8-15 mA
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20-25 min
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1×藍色陰極緩沖液
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冰浴電泳
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指示前沿至凝膠頂部三分(fēn)之二處，更換内槽緩沖液爲1×BN/CN 電泳緩沖液
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恒電壓
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繼續電泳時間
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結束電流
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緩沖液
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120 V
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45 min +
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3-5 mA
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1×BN/CN電泳緩沖液
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冰浴電泳
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3. 轉膜：
BN-PAGE轉膜必須用PVDF膜，不能用NC膜，因爲NC膜與G-250結合非常緊密，不易去(qù)除。轉膜後PVDF膜上的藍色染料可(kě)以用無水甲醇漂洗去(qù)除。轉膜緩沖液推薦使用10×BN轉膜緩沖液（貨号：BC600P）。
4. 染色：
4.1 将電泳後的PAGE膠取下放(fàng)入塑料容器中，加入适量FastBlue蛋白(bái)染色液或常規考馬斯亮藍染色液（以剛剛覆蓋過膠面爲适），條帶1-2分(fēn)鍾即可(kě)見(jiàn)。
4.2 搖床常溫搖動10-15分(fēn)鍾至條帶清晰可(kě)見(jiàn)。
4.3 加入适量蒸餾水脫色，期間更換1-2次蒸餾水，搖床常溫搖動10-15分(fēn)鍾至背景幹淨。
4.4 觀察保存結果。
5. 實驗示例：
BN-PAGE 3-12% Precast Gel
穩壓120V 1.5 h 1×BN/CN電泳緩沖液 冰浴電泳
BN-PAGE 4-16% Precast Gel
恒壓 120V 2 h 1×BN/CN電泳緩沖液 冰浴電泳
Blue/Clear 非變性凝膠電泳試劑盒(RTD6139/RTD6138)
使用該産品發表部分(fēn)文章(zhāng)列表：
1. [2021 IF=10.15] SlRIP1b
is a global organellar RNA editing factor, required for normal fruit
development in tomato plants
Author: Jinyan Li, Keru Wang,
Yongfang Yang, Yao Lu, Kaicheng Cui, Yajing Ji, Liqun Ma, Ke Cheng, Oren
Ostersetzer-Biran, Feng Li, Guiqin Qu, Benzhong Zhu, Daqi Fu, Yunbo Luo,
Hongliang Zhu
Journal: New
Phytologist 2023，Volume237, Issue4，February 2023，Pages 1188-1203
Institution： China Agricultural University
Paper link：https://doi.org/10.1111/nph.18594
2.
[2022 IF=8.0] Tektin bundle interacting protein, TEKTIP1,
functions to stabilize the tektin bundle and axoneme in mouse sperm flagella
Author: Xin?Yan Geng,Hui?Juan Jin,
Lan Xia.Bin?Bin Wang,Su?Ren Chen
Journal: Cellular and Molecular Life Sciences (2024)
81:118
Institution: Beijing
Normal University
Paper link：https://doi.org/10.1007/s00018-023-05081-3