RealPAGE 3-8% Tris-醋酸預制膠

● 産品組成：

● 産品簡介：

Tris-醋酸-SDS-PAGE凝膠電泳适合于分(fēn)離(lí)高分(fēn)子量蛋白(bái)，可(kě)以有效分(fēn)離(lí)50-500 kD範圍内蛋白(bái)；電泳體(tǐ)系呈中性，抑制半胱氨酸的二次氧化，防止二硫鍵在凝膠中交聯；在變性還(hái)原電泳中，電泳緩沖體(tǐ)系中加入抗氧化劑，整個電泳過程都(dōu)在還(hái)原條件(jiàn)下進行，有效防止二硫鍵的形成。

RealPAGE 3-8% Tris-醋酸預制膠爲梯度凝膠，濃度爲3-8%，厚度爲1.1 mm，12齒，每個泳道可(kě)以上樣最大(dà)30 μl樣品。另外，本公司也提供Tris-醋酸-SDS-PAGE電泳試劑盒（貨号：RTD6155）包含預制膠、蛋白(bái)上樣、蛋白(bái)電泳、染色及轉膜所需的全部試劑。

● 貯存及運輸：

   按照(zhào)标簽溫度貯存；試劑盒常溫運輸。

● 使用說(shuō)明：

1. 實驗準備：

1.1 20×樣品還(hái)原劑爲幹粉，4℃貯存。用前加入1ml超純水震蕩徹底溶解後使用，已經溶解的20×樣品還(hái)原劑-20℃貯存。

1.2 400×抗氧化劑爲幹粉，常溫貯存。用前加入15 ml超純水震蕩徹底溶解後使用，已經溶解的400×抗氧化劑-20℃貯存。

2. 電泳：

注：伯樂Mini III或Mini-PROTEAN Tetra Cell，天能VE-180，六一24K系列電泳槽請(qǐng)确保密封條的安裝方向（如(rú)圖）。

六一其他(tā)系列，君意東方JY-SCZ2/4，百晶BG-verMINI等電泳槽可(kě)以直接使用預制膠。

不兼容Thermol系列電泳槽。

2.2 準備1×電泳緩沖液：

2.2.1 外槽緩沖液：取适量體(tǐ)積1×電泳緩沖液用于外槽緩沖液。

2.2.2 内槽緩沖液：對于還(hái)原樣品電泳，200 ml 1×電泳緩沖液中加0.5 ml 400×抗氧化劑，混合均勻後用于内槽緩沖液。對于非還(hái)原樣品電泳，直接在内槽中加入1×電泳緩沖液，不要添加400×抗氧化劑。

2.3準備上樣樣品：

注：表格以配制10 μl樣品爲例，其他(tā)體(tǐ)積按照(zhào)比例調整。

2.4電泳過程；

在電泳槽的内槽内加入1×電泳緩沖液(讓電泳緩沖液漫過加樣孔)，輕輕的撥出梳子，用1ml吸頭沖洗加樣孔3次；随後在電泳槽外槽加入适量的1×電泳緩沖液。上樣，電泳。

3. 染色：

3.1 将電泳後的PAGE膠取下放(fàng)入塑料容器中，加入适量FastBlue蛋白(bái)染色液（以剛剛覆蓋過膠面爲适），搖床常溫搖動，條帶5-10分(fēn)鍾即可(kě)見(jiàn)（蛋白(bái)含量高于1 μg條帶）。

3.2 搖床常溫繼續搖動15-30分(fēn)鍾至條帶清晰可(kě)見(jiàn)。

3.3 加入适量蒸餾水脫色，期間更換1-2次蒸餾水，搖床常溫搖動10-15分(fēn)鍾至背景幹淨。

3.4 觀察保存結果。

4. 轉膜：

4.1 轉印膜選擇：

Tris-醋酸凝膠轉膜可(kě)以使用NC膜和PVDF膜，需要選擇0.45 μm孔徑。PVDF膜使用前注意需要用甲醇潤濕活化。

4.2 10×Tris-醋酸轉膜緩沖液（溶液型）配制：

将10×Tris-醋酸轉膜緩沖液（濕轉，粉末型）粉末溶解于500 ml超純水中，即配成500 ml 10×Tris-醋酸轉膜緩沖液（溶液型），不要調節pH，pH~7.2。

4.3 準備1×轉膜緩沖液：

注：甲醇和SDS在轉膜中有拮抗作(zuò)用。甲醇使蛋白(bái)更加結合在膜上，而SDS讓蛋白(bái)更加離(lí)開膜。因此對大(dà)蛋白(bái)轉膜來(lái)說(shuō)，多加SDS，少加甲醇；而對小蛋白(bái)轉膜，多加甲醇，少加SDS。

4.4 轉膜條件(jiàn)：

以下轉膜條件(jiàn)僅供參考，客戶針對自(zì)己的目的蛋白(bái)，最好經過1-2次預實驗後，确定最佳的轉膜條件(jiàn)。