Tris-醋酸非變性PAGE電泳試劑盒(含預制膠)
貨号
|
名稱
|
規格
|
RTD6156
|
Tris-醋酸非變性PAGE電泳試劑盒(含預制膠)
|
10次
|
● 産品組成:
貨号
|
名稱
|
規格
|
保存
|
RTD6154-0308
|
3-8%
RealPAGE Tris醋酸預制膠(U型闆,通用型,12孔)
|
10闆/盒
|
4℃
|
TG170
|
10×Tris-甘氨酸電泳緩沖液(非變性電泳,溶液型)
|
500
ml
|
RT
|
PL111-01
|
5×非變性非還(hái)原蛋白(bái)上樣緩沖液
|
1 ml
|
-20℃
|
RTD6202
|
FastBlue蛋白(bái)快(kuài)速染色液
|
500 ml
|
RT
|
TA5030P
|
10×Tris-醋酸轉膜緩沖液(濕轉,粉末型)
|
500
ml
|
RT
|
|
說(shuō)明書(shū)
|
一份
|
-
|
● 産品簡介:
Tris-醋酸非變性PAGE凝膠電泳适合于分(fēn)離(lí)高分(fēn)子量蛋白(bái),可(kě)以有效分(fēn)離(lí)50-500 kD範圍内蛋白(bái);在電泳中,電泳緩沖體(tǐ)系和上樣緩沖液中都(dōu)不含有變性劑和還(hái)原劑,整個電泳過程都(dōu)在完全非變性(非變性非還(hái)原)條件(jiàn)下進行,可(kě)以很好的保持蛋白(bái)的活性和聚體(tǐ)狀态。
本公司提供的Tris-醋酸非變性PAGE電泳試劑盒包含預制膠、蛋白(bái)上樣、蛋白(bái)電泳、染色及轉膜所需要的全部試劑。試劑盒配套的預制膠爲梯度凝膠,濃度爲3-8%,厚度爲1.1 mm,12齒,每個泳道可(kě)以上樣最大(dà)30 μl樣品。
本試劑盒用于蛋白(bái)非變性電泳,不能用于變性電泳,本試劑盒可(kě)以使用10次。
● 貯存及運輸:
按照(zhào)标簽溫度貯存;試劑盒常溫運輸。
● 使用說(shuō)明:
一. 電泳:
注:伯樂Mini III或Mini-PROTEAN Tetra Cell,天能VE-180,六一24K系列電泳槽請(qǐng)确保密封條的安裝方向(如(rú)圖)。
六一其他(tā)系列,君意東方JY-SCZ2/4,百晶BG-verMINI等電泳槽可(kě)以直接使用預制膠。
不兼容Thermol系列電泳槽。
1.2 準備1×電泳緩沖液:
總體(tǐ)積
|
500
ml
|
10×Tris-甘氨酸電泳緩沖液(非變性電泳,溶液型)
|
50 ml
|
超純水
|
450 ml
|
1.3準備上樣樣品:
注:表格以配制10 μl樣品爲例,其他(tā)體(tǐ)積按照(zhào)比例調整。
組份
|
總體(tǐ)積10 μl
|
蛋白(bái)樣品
|
x μl
|
5×非變性非還(hái)原蛋白(bái)上樣緩沖液
|
2 μl
|
超純水
|
補至10 μl
|
|
不要加熱(rè)
|
1.4電泳過程;
在電泳槽的内槽内加入1×電泳緩沖液(讓電泳緩沖液漫過加樣孔),輕輕的撥出梳子,用1ml吸頭沖洗加樣孔3次;随後在電泳槽外槽加入适量的1×電泳緩沖液。上樣,電泳。
恒電壓
|
起始電流
|
結束電流
|
電泳時間
|
150V
|
40-55 mA/闆膠
|
25-40 mA/闆膠
|
60+min
|
注:冰浴電泳(可(kě)選)
|
二. 染色:
2.1 将電泳後的PAGE膠取下放(fàng)入塑料容器中,加入适量FastBlue蛋白(bái)染色液(以剛剛覆蓋過膠面爲适),搖床常溫搖動,條帶5-10分(fēn)鍾即可(kě)見(jiàn)(蛋白(bái)含量高于1
μg條帶)。
2.2 搖床常溫繼續搖動15-30分(fēn)鍾至條帶清晰可(kě)見(jiàn)。
2.3 加入适量蒸餾水脫色,期間更換1-2次蒸餾水,搖床常溫搖動10-15分(fēn)鍾至背景幹淨。
2.4
觀察保存結果。
2.5
染色示例:
三. 轉膜:
3.1 轉印膜選擇:
Tris-醋酸凝膠轉膜可(kě)以使用NC膜和PVDF膜,需要選擇0.45 μm孔徑。PVDF膜使用前注意需要用甲醇潤濕活化。
3.2 10×Tris-醋酸轉膜緩沖液(溶液型)配制:
将10×Tris-醋酸轉膜緩沖液(濕轉,粉末型)粉末溶解于500 ml超純水中,即配成500 ml 10×Tris-醋酸轉膜緩沖液(溶液型),不要調節pH,pH~7.2。
3.3 準備1×轉膜緩沖液:
|
|
1×即用型轉膜緩沖液 配制量 1升
|
|
10×Tris-醋酸轉膜緩沖液(溶液型)
|
100
ml
|
|
|
變性蛋白(bái)
|
非變性蛋白(bái)
|
<20 kD蛋白(bái)
|
無水甲醇
|
20%
|
5-10%
|
SDS
|
0.01%
|
0.01%
|
20-80 kD蛋白(bái)
|
無水甲醇
|
10%
|
0-5%
|
SDS
|
0.05%
|
0.05%
|
>80 kD蛋白(bái)
|
無水甲醇
|
10%(NC膜)
0-5%(PVDF膜)
|
0%
|
SDS
|
0.1%
|
0.1%
|
|
超純水
|
定容至1升,不要調節pH,pH~7.2
|
注:甲醇和SDS在轉膜中有拮抗作(zuò)用。甲醇使蛋白(bái)更加結合在膜上,而SDS讓蛋白(bái)更加離(lí)開膜。因此對大(dà)蛋白(bái)轉膜來(lái)說(shuō),多加SDS,少加甲醇;而對小蛋白(bái)轉膜,多加甲醇,少加SDS。
3.4 轉膜條件(jiàn):
以下轉膜條件(jiàn)僅供參考,客戶針對自(zì)己的目的蛋白(bái)大(dà)小,最好經過預實驗後,确定最佳的轉膜條件(jiàn)。
膜孔徑
|
蛋白(bái)大(dà)小
|
穩流
|
建議(yì)時間
|
降溫措施
|
0.22 μm
|
低于20 kD
|
200 mA
|
~30分(fēn)鍾
|
不需要
|
0.45 μm
|
20-50 kD
|
300 mA
|
~45分(fēn)鍾
|
需要
|
0.45 μm
|
50-200 kD
|
350 mA
|
~50分(fēn)鍾
|
需要
|
0.45 μm
|
高于200
kD
|
350 mA
|
~2.5-4.5小時
|
需要
|