糖蛋白(bái)染色試劑盒

● 産品簡介：                                                

本産品用于PAGE 凝膠或蛋白(bái)免疫印記硝酸纖維素膜上糖蛋白(bái)的檢測。整個染色2.5小時完成。染色後的糖蛋白(bái)爲品紅(hóng)色條帶，背景爲淺粉色或者無色。該試劑盒檢測的靈敏度一般可(kě)以達到微克級别，但(dàn)實際靈敏度跟靶蛋白(bái)糖基化程度相(xiàng)關，可(kě)以用于 SDS-PAGE 和2D電泳的凝膠檢測，也可(kě)以用于瓊脂糖凝膠電泳的檢測（但(dàn)背景較高），還(hái)可(kě)以用于硝酸纖維素印迹膜的檢測。

按照(zhào)每次使用25 ml糖蛋白(bái)染色試劑計(jì)算，本産品可(kě)以染色 8-10塊mini-PAGE（8×10cm）膠或印迹膜。

● 産品組成：

● 儲存條件(jiàn)

按照(zhào)标簽溫度貯存，常溫運輸。開封後一年(nián)有效。

●實驗前準備：

1. 配制 3%醋酸溶液：将 15 ml 自(zì)備的冰醋酸與 485 ml 超純水混勻，常溫保存備用。

2. 配制 50%甲醇溶液：将 250 ml 甲醇與 250 ml 超純水混勻，常溫保存備用。

3. 配制氧化試劑溶液： 将本試劑盒提供的氧化試劑幹粉轉移到本試劑盒提供的250ml空塑料瓶中， 然後加入250 ml的超純水，充分(fēn)混勻溶解後得(de)到氧化試劑溶液，常溫保存備用。

4. 配制還(hái)原試劑溶液： 将本試劑盒提供的還(hái)原試劑幹粉轉移到本試劑盒提供的 250ml 空塑料瓶中，然後加入 250 ml的超純水，充分(fēn)混勻溶解後得(de)到還(hái)原試劑溶液，常溫保存備用。

5. 配制1×SDS-PAGE上樣緩沖液：取0.4 ml 5×MonoClolor 蛋白(bái)上樣緩沖液，加入1.6 ml超純水，-20℃貯存備用。

6. 配制陽性對照(zhào)（辣根過氧化物酶）溶液：向裝有 1 mg 辣根過氧化物酶固體(tǐ)的棕色管中加入 1 ml 1×SDS-PAGE 上樣緩沖液，所得(de)辣根過氧化物酶溶液的濃度即爲 1mg/ml，然後适量分(fēn)裝成8-10管， 留下一管當天使用， 其餘的放(fàng)-20℃長期保存。 對于 8×10 cm的凝膠來(lái)說(shuō)，每條泳道加 10 μl 的陽性對照(zhào)溶液即可(kě)，上樣前95℃處理(lǐ)5分(fēn)鍾。

7. 配制陰性對照(zhào)（大(dà)豆胰蛋白(bái)酶抑制劑）溶液：向裝有 1 mg 大(dà)豆胰蛋白(bái)酶抑制劑幹粉的管中加入 1×SDS-PAGE 上樣緩沖液（自(zì)備），所得(de)大(dà)豆胰蛋白(bái)酶抑制劑溶液的濃度即爲 1 mg/ml，然後适量分(fēn)裝成8-10管， 留下一管當天使用，其餘的放(fàng)-20℃長期保存。對于 8×10 cm的凝膠來(lái)說(shuō)，每條泳道加 10 μl 的陽性對照(zhào)溶液即可(kě)，上樣前95℃處理(lǐ)5分(fēn)鍾。

8. 樣品稀釋：用 5×MonoClolor 蛋白(bái)上樣緩沖液将樣品濃度稀釋爲 1 mg/ml，SDS-PAGE 上樣緩沖液終濃度爲 1×。對于 8×10 cm的凝膠來(lái)說(shuō)，每條泳道加 5-10 μl 的樣品即可(kě)，上樣前95℃處理(lǐ)5分(fēn)鍾。。

● 凝膠染色的操作(zuò)步驟（膜染色從(cóng)步驟3開始）：

注意事(shì)項：

1.以下步驟僅針對0.75mm厚度大(dà)小8×10cm的凝膠，1-1.5mm厚度凝膠或更大(dà)體(tǐ)積凝膠适當增加液體(tǐ)體(tǐ)積并延長操作(zuò)時間。

2. 請(qǐng)在通風(fēng)櫥中進行以下操作(zuò)。

一. 固定：

取出電泳後的 SDS-PAGE 凝膠，在50 ml 50%甲醇溶液中，搖床慢(màn)搖30分(fēn)鍾，棄甲醇溶液。

二. 漂洗：

50 ml超純水洗滌凝膠兩次，每次搖床慢(màn)搖10分(fēn)鍾，棄超純水。

三. 氧化：

凝膠中加入 25 ml 氧化試劑，搖床慢(màn)搖15分(fēn)鍾，棄溶液。

四. 漂洗：

50 ml超純水洗滌凝膠3次，每次搖床慢(màn)搖5分(fēn)鍾，棄溶液。

五. 染色：

凝膠中加入25 ml糖蛋白(bái)染色試劑，搖床慢(màn)搖15 分(fēn)鍾，糖蛋白(bái)會在5-10分(fēn)鍾内顯現品紅(hóng)色。若檢測的糖蛋白(bái)含量較低，适當延長顯色時間。棄染色溶液。

注：若糖蛋白(bái)染色試劑中有晶體(tǐ)析出，隻需取上清液即可(kě)，不要加熱(rè)溶解晶體(tǐ)。

染色步驟會産生(shēng)有刺激性氣味氣體(tǐ)，請(qǐng)在通風(fēng)櫥中操作(zuò)。

六. 還(hái)原：

凝膠中加入 25 ml 還(hái)原試劑，搖床慢(màn)搖15分(fēn)鍾，棄溶液。此時凝膠背景略帶紅(hóng)色。

七. 漂洗：

加入50 ml 3%醋酸溶液搖床慢(màn)搖洗滌膠塊3次，每次10分(fēn)鍾，直至膠背景紅(hóng)色變淺，接近淡紅(hóng)色或無色，此時紅(hóng)色糖蛋白(bái)主帶清晰可(kě)見(jiàn)。

八. 保存：

膠塊保存在50 ml 3%醋酸溶液中。

● 實驗記錄表格

實驗日(rì)期：

實驗示例：

蛋白(bái)轉到NC膜後糖蛋白(bái)染色