植物總蛋白(bái)提取試劑盒（适用于模式植物）

Plant Total Protein Isolation Kit（for model plant）

● 産品貨号及規格

● 産品簡介

本産品用于快(kuài)速提取模式植物的總蛋白(bái)，可(kě)以處理(lǐ)各種常見(jiàn)模式植物如(rú)拟南(nán)芥、小麥、煙草、玉米、水稻等植物的葉片、莖和根等。得(de)到的蛋白(bái)可(kě)用于SDS-PAGE凝膠電泳和Western印迹分(fēn)析。

該試劑盒對模式植物的幼嫩組織有更好的提取效果，衰老組織和富含多糖多酚植物的蛋白(bái)提取效果不佳。此類植物的蛋白(bái)提取可(kě)以選擇通用型植物蛋白(bái)提取試劑盒（貨号：RTD8103）。

該試劑盒含有除丙酮外的其他(tā)所有試劑，使用方便，能在2小時内得(de)到高純度的蛋白(bái)樣品。

每次提取使用0.7 ml試劑B-植物蛋白(bái)提取緩沖液I計(jì)算，該試劑盒可(kě)以使用20次。

●  使用方法：

實驗準備材料：

液氮；研缽；1.5ml離(lí)心管；丙酮；70℃水浴鍋；幹浴器；冷(lěng)凍離(lí)心機(jī)；制冰機(jī)；渦旋振蕩器。

I 樣品破碎：

1. 取植物樣本，在液氮條件(jiàn)下，用研缽充分(fēn)研磨成粉末。

關鍵步驟：此步驟非常重要，樣本研磨越細越好，研磨不徹底會導緻蛋白(bái)濃度偏低。

II 沉澱雜質：

2. 取1.5 ml離(lí)心管，加入1 ml即用型試劑A（按照(zhào)下表配制），迅速将約0.1克粉末加入其中，漩渦混勻，RT 放(fàng)置5分(fēn)鍾。

關鍵步驟：樣品粉末量不能超過0.1克，否則将導緻蛋白(bái)提取得(de)率和純度大(dà)大(dà)降低。

即用型試劑A-樣本雜質去(qù)除劑配制

3.12000g4℃離(lí)心5分(fēn)鍾，去(qù)除上清，保留沉澱。

注：觀察沉澱顔色，如(rú)沉澱顔色爲綠色，繼續步驟4；如(rú)沉澱顔色爲淺色或白(bái)色，跳(tiào)過步驟4，直接進行步驟5。

4. 沉澱中加入1 ml即用型試劑A，漩渦混勻，RT放(fàng)置5分(fēn)鍾，12000rpm4℃離(lí)心5分(fēn)鍾。

5. 沉澱中加入1 ml 預冷(lěng)的丙酮（自(zì)備，試劑盒不提供）和10 μl DTT溶液，漩渦震蕩（此時溶液狀态應爲白(bái)色懸液），徹底重懸，12000rpm4℃離(lí)心5分(fēn)鍾，去(qù)除上清，收集沉澱。

6. 快(kuài)甩離(lí)心數秒，殘留上清用移液器徹底吸棄，沉澱物通風(fēng)晾幹1-2分(fēn)鍾至沉澱幹燥。

  關鍵步驟：沉澱不能過分(fēn)幹燥，否則會影(yǐng)響以下步驟蛋白(bái)的溶解性。

III 蛋白(bái)提取：

7. 蛋白(bái)沉澱中加入0.7 ml 即用型試劑B（按照(zhào)下表配制），漩渦震蕩，徹底重懸沉澱（此時溶液狀态爲懸浮溶液）；70℃水浴1小時，間歇混勻。

即用型試劑B-植物蛋白(bái)提取緩沖液配制：

8.12000g4℃離(lí)心10分(fēn)鍾，小心取上清（通常可(kě)取600 μl）于1.5ml離(lí)心管中，不要吸取沉澱。

9. 蛋白(bái)樣品-20℃貯存或進行下遊電泳及Western Blot等實驗。

注： ① 如(rú)要濃縮蛋白(bái)，可(kě)以選擇蛋白(bái)濃縮試劑盒（貨号：RTD9101）。

    ② 由于提取過程中使用了DTT，爲了避免對蛋白(bái)濃度測定的影(yǐng)響，建議(yì)蛋白(bái)濃度測定使用Bradford方法（貨号：RTP7101）。