PAGE膠蛋白(bái)微量回收試劑盒（貨号：RTD8108）       

● 試劑盒組成：

● 運輸、儲存條件(jiàn)和效期：

常溫運輸，标簽溫度保存，有效期爲一年(nián)。

● 産品簡介及使用說(shuō)明：

蛋白(bái)電泳不僅可(kě)用于檢測蛋白(bái)質的相(xiàng)對分(fēn)子質量，而且也是分(fēn)離(lí)純化蛋白(bái)質的重要工(gōng)具之一，随着蛋白(bái)質技術(shù)的微量化，有必要從(cóng)凝膠中回收蛋白(bái)質以用于制備抗體(tǐ)、免疫印迹、氨基酸組分(fēn)分(fēn)析或末端序列測定等，本産品就(jiù)是專門(mén)爲此用途開發的微量蛋白(bái)膠回收法，回收效率在50-80%。

按照(zhào)每次使用400 μl 溶液A計(jì)算，試劑盒至少可(kě)以使用20 次。

● 使用方法：

1. 電泳：

按常規方法進行變性（SDS-PAGE）或非變性蛋白(bái)電泳（Native-PAGE）。

2. 切膠：

2.1 用手術(shù)刀片将銅染（貨号：RTD6207）或鋅染（貨号：RTD6206）的膠塊中含有目的條帶的部分(fēn)膠切下（盡可(kě)能地把多餘的膠切除，否則會影(yǐng)響回收效率），放(fàng)入1.5 ml的離(lí)心管中，用相(xiàng)應的消除液将膠中蛋白(bái)質條帶脫色到膠體(tǐ)接近無色透明，超純水漂洗凝膠兩次，保留膠體(tǐ)進行步驟3。

2.2 由于考馬斯亮藍染色蛋白(bái)的特殊性，不建議(yì)考染後進行切膠操作(zuò)。建議(yì)把樣品分(fēn)多孔上樣，電泳後隻切其中一個膠孔的膠條進行染色，然後将此膠條放(fàng)回到在整體(tǐ)膠中原來(lái)的位置，通過顯色膠條上的蛋白(bái)條帶找到在未染色膠上對應區域，并切下膠體(tǐ)進行步驟3。

2.3 如(rú)不進行染色，可(kě)以使用預染Marker判斷目的蛋白(bái)的位置進行切膠進行步驟3。但(dàn)此方法缺點在于蛋白(bái)的位置難以精确判斷。

3. 研磨處理(lǐ)：

3.1 稱取1.5 ml離(lí)心管中膠塊重量；用研磨杵充分(fēn)将膠塊壓磨成盡可(kě)能細小的碎片。

3.2 即用型溶液A配制：

    根據溶液A的使用量配制即用型溶液A的體(tǐ)積。配制比例爲：1 ml溶液A加入10 μl 1 M DTT溶液。

3.3根據膠塊重量加入即用型溶液A，用研磨杵再次充分(fēn)研磨，4℃搖床慢(màn)搖洗脫過夜（12-16小時）。

注：膠塊重量和即用型溶液A體(tǐ)積大(dà)體(tǐ)按照(zhào)1:4比例加入，如(rú)膠塊100 mg加入400 μl即用型溶液A，溶液A使用量甯多勿少。洗脫時間與凝膠濃度，蛋白(bái)分(fēn)子量大(dà)小有關，膠濃度越高，分(fēn)子量越大(dà)，洗脫時間越長。

4. 過濾除膠：

用1 ml 的去(qù)尖吸頭吸取混合物至過濾柱中（過濾柱放(fàng)入收集管中），注意将碎膠一起吸入，溶液過多時可(kě)分(fēn)次加入，12,000 rpm 離(lí)心2分(fēn)鍾，保留收集管中的濾出液（包含蛋白(bái)）。

5. 蛋白(bái)沉澱：

     5.1 将濾出液轉移到1.5 ml離(lí)心管中，加入1/10體(tǐ)積的溶液B-助沉液，混勻，常溫放(fàng)置15 min。

     5.2 加入步驟5.1溶液1/4體(tǐ)積的溶液C-沉澱液，充分(fēn)混勻後，冰浴15 min。

         注：加入溶液C後溶液變渾濁，需要徹底充分(fēn)混勻。

5.3  4℃ 12,000 rpm離(lí)心10分(fēn)鍾，去(qù)除上清，保留蛋白(bái)沉澱。

   注：由于溶液B-助沉液的作(zuò)用，此步驟得(de)到管底很明顯的蛋白(bái)沉澱物。

6. 蛋白(bái)漂洗：

6.1 蛋白(bái)沉澱中加入1 ml預冷(lěng)的丙酮（自(zì)備，試劑盒不提供），徹底重懸沉澱，混勻，冰浴放(fàng)置15 min。

6.2 4℃ 12,000 rpm離(lí)心10分(fēn)鍾，去(qù)除上清，保留沉澱。

    注：通過丙酮的漂洗，去(qù)除步驟5.3中蛋白(bái)沉澱中的非蛋白(bái)組份。

6.3 離(lí)心管快(kuài)甩離(lí)心，用10 μl吸頭将離(lí)心管中殘餘溶液徹底吸淨，常溫開口風(fēng)幹1-2分(fēn)鍾，待殘留的液體(tǐ)揮發幹淨。

7. 蛋白(bái)貯存：

實驗示例：