1.4.4 4℃16,000g離(lí)心15分(fēn)鍾，去(qù)掉上清，保留沉澱。
1.5 細胞組蛋白(bái)提取：
1.5.1 沉澱重懸于0.25 ml 提取緩沖液中，超聲處理(lǐ)（推薦130W功率超聲2分(fēn)鍾，超聲2秒，停頓3秒），冰浴30分(fēn)鍾，間歇混勻。
注：超聲處理(lǐ)爲必須步驟，否則沉澱很難徹底溶解，大(dà)大(dà)降低組蛋白(bái)提取得(de)率。
1.5.2 4℃ 16000g 離(lí)心10分(fēn)鍾，收集組蛋白(bái)上清。
1.5.3 即用型中和緩沖液配制：
取适當體(tǐ)積的中和緩沖液，在使用前數分(fēn)鍾内加入1/100體(tǐ)積的PMSF（100×），1/40體(tǐ)積去(qù)乙酰化酶抑制劑和1/500體(tǐ)積
1M DTT，配成即用型中和緩沖液，随後立即放(fàng)于冰上待用。
1.5.4 組蛋白(bái)上清中加入0.3倍體(tǐ)積即用型中和緩沖液，混勻，即爲組蛋白(bái)提取溶液。
注：組蛋白(bái)溶液電泳檢測時，如(rú)果加入上樣緩沖液後溶液變黃(huáng)，加入1/10體(tǐ)積中和緩沖液将顔色調整爲藍色後再上樣。
1.6 組蛋白(bái)貯存：
組蛋白(bái)溶液-20℃貯存一周或-80℃長期貯存。
二 新鮮組織組蛋白(bái)提取：
2.1即用型裂解緩沖液配制：
常溫融解試劑盒中的試劑，溶解後立即放(fàng)置在冰上，混勻。取适當體(tǐ)積的裂解緩沖液，在使用前數分(fēn)鍾内加入1/100體(tǐ)積的PMSF（100×）和1/40體(tǐ)積去(qù)乙酰化酶抑制劑，配成即用型裂解緩沖液，随後立即放(fàng)于冰上待用。
2.2準備組織：
組織塊迅速置于預冷(lěng)的1×PBS 中，漂洗數次，濾紙吸幹水分(fēn)，将組織切成細小的組織塊，稱重組織，按照(zhào)下表加入各試劑的量
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組織重量（mg）
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即用型裂解緩沖液（μl）
第一次裂解
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即用型裂解緩沖液（μl）
第二次裂解
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50
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1000
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500
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注：50
mg新鮮組織相(xiàng)當于細胞沉澱體(tǐ)積（PCV，Packed Cell Volume）約爲100 μl。
2.3 組織裂解：
2.3.1第一次裂解：組織中加入即用型裂解緩沖液（10倍PCV體(tǐ)積），用玻璃勻漿器冰浴勻漿10-20次,以徹底裂解細胞，收集裂解混合物，冰浴處理(lǐ)15分(fēn)鍾，間歇混勻。
2.3.2 第二次裂解：4℃ 600 g離(lí)心5
min收集細胞，盡最大(dà)努力吸盡上清，細胞沉澱中加入即用型裂解緩沖液（5倍PCV體(tǐ)積）。
2.3.3用超聲破碎細胞（推薦130W功率超聲1分(fēn)鍾，超聲2秒，停頓3秒）或用玻璃勻漿
器冰浴勻漿5-10次或使用注射器用27G針頭處理(lǐ)裂解物10-15次（貨号：PE2719，蛋白(bái)提取針頭套裝）,以徹底裂解細胞，收集裂解混合物，冰浴處理(lǐ)15分(fēn)鍾。
注：此步驟不要過度勻漿或超聲處理(lǐ)，否則得(de)到的組蛋白(bái)會污染較多的胞漿蛋白(bái)，可(kě)以用台盼藍染色觀察細胞裂解情況，建議(yì)70-80%細胞裂解爲适宜裂解程度。加入裂解緩沖液後，細胞膜完全破裂，胞漿完全釋放(fàng)，但(dàn)細胞核保持完整。鏡檢下可(kě)以看(kàn)到完全染成藍色的細胞核。
2.3.4 16,000g 4℃離(lí)心15分(fēn)鍾，去(qù)掉上清，保留沉澱。
2.4 組織組蛋白(bái)提取：
2.4.1 沉澱重懸于0.25 ml 提取緩沖液中，超聲處理(lǐ)（推薦130W功率超聲2分(fēn)鍾，超聲2秒，停頓3秒），冰浴30分(fēn)鍾，間歇混勻。
注：超聲處理(lǐ)爲必須步驟，否則沉澱很難徹底溶解，大(dà)大(dà)降低組蛋白(bái)提取得(de)率。
2.4.2 4℃16000g 離(lí)心10分(fēn)鍾，收集組蛋白(bái)上清。
2.4.3 即用型中和緩沖液配制：
取适當體(tǐ)積的中和緩沖液，在使用前數分(fēn)鍾内加入1/100體(tǐ)積的PMSF（100×），1/40體(tǐ)積去(qù)乙酰化酶抑制劑和1/500體(tǐ)積
1M DTT，配成即用型中和緩沖液，随後立即放(fàng)于冰上待用。
2.4.4 組蛋白(bái)上清中加入0.3倍體(tǐ)積即用型中和緩沖液，混勻，即爲組蛋白(bái)提取溶液。
注：組蛋白(bái)溶液電泳檢測時，如(rú)果加入上樣緩沖液後溶液變黃(huáng)，加入1/10體(tǐ)積中和緩沖液将顔色調整爲藍色後再上樣。
2.5 組蛋白(bái)貯存：
組蛋白(bái)溶液-20℃貯存一周或-80℃長期貯存。