柱式動物總蛋白(bái)提取試劑盒（細胞樣品，變性提取）
Column Animal Cells Denaturing Total Protein
Extraction Kit Ver.740164
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貨号
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産品名稱
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規格
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RTD8302
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柱式動物總蛋白(bái)提取試劑盒（細胞樣品，變性提取）
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50次
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● 産品包裝：
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貨号
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組份
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規格
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貯存
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RTD8302-01
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變性裂解緩沖液
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25 ml
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4℃
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CD-50
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離(lí)心柱套裝
（包含離(lí)心柱和2 ml連蓋收集管）
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50套
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RT
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● 産品簡介：
本試劑盒可(kě)從(cóng)動物懸浮細胞或貼壁細胞中提取總蛋白(bái)，用變性裂解緩沖液配合離(lí)心柱裂解細胞，無需超聲處理(lǐ)打斷DNA，提取過程簡便高效，大(dà)約10分(fēn)鍾即可(kě)完成蛋白(bái)提取，可(kě)以提取到細胞内的絕大(dà)多數蛋白(bái)質（包括膜，細胞器，核，核基質和胞質蛋白(bái)）。獲得(de)的總蛋白(bái)可(kě)用于SDS-PAGE
Western Blot檢測、免疫沉澱（IP）等後續研究。由于裂解緩沖液中含有SDS等強變性劑，不建議(yì)用于免疫共沉澱（Co-IP）、EMSA以及酶活性分(fēn)析等與蛋白(bái)活性相(xiàng)關的實驗。
按照(zhào)每次使用~5×106培養細胞加0.5 ml裂解緩沖液計(jì)算，本試劑盒大(dà)約可(kě)以使用50 次。
● 保存、效期及運輸：
按照(zhào)标簽溫度貯存，有效期一年(nián)，試劑盒常溫運輸。
● 用前必讀(dú)：
1.
離(lí)心機(jī)請(qǐng)調整成RCF/g模式，按照(zhào)離(lí)心力設置離(lí)心機(jī)（不要根據轉速rpm模式設置），所有離(lí)心步驟都(dōu)需要在4℃低溫離(lí)心機(jī)中進行。
2.
溶液混勻後放(fàng)置于冰上。将離(lí)心柱套裝蓋好管蓋，放(fàng)置于冰上預冷(lěng)。
3.
蛋白(bái)提取推薦添加蛋白(bái)酶抑制劑（自(zì)備，試劑盒不提供），根據蛋白(bái)酶抑制劑母液濃度提前添加在裂解緩沖液中（添加時按照(zhào)1:100添加，即1
ml裂解緩沖液 添加10
μl抑制劑）；研究蛋白(bái)磷酸化，需要添加磷酸酶抑制劑（自(zì)備，試劑盒不提供）。
4.
蛋白(bái)定量推薦使用BCA方法，可(kě)以選擇BCA蛋白(bái)濃度測定試劑盒（貨号：RTP7102）。
● 使用說(shuō)明：
一. 準備即用型裂解緩沖液：
取适當體(tǐ)積的預冷(lěng)裂解緩沖液，在使用前數分(fēn)鍾内加入1/100體(tǐ)積的蛋白(bái)酶抑制劑（100×）（自(zì)備，試劑盒不提供），如(rú)果進行蛋白(bái)磷酸化研究，需要加入1/100體(tǐ)積的磷酸酶抑制劑（100×）（自(zì)備，試劑盒不提供），随後立即放(fàng)于冰上待用。
二. 貼壁細胞蛋白(bái)提取：
2.1 将預冷(lěng)的 1×PBS直接加入培養闆，培養皿或培養瓶中清洗貼壁細胞，吸去(qù)上清。
2. 2 按照(zhào)下表中将相(xiàng)應體(tǐ)積的變性裂解緩沖液均勻的加入整個器皿表面，用移液器吹打混勻，冰浴5分(fēn)鍾。
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細胞類型
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培養器皿
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細胞數量
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細胞沉澱體(tǐ)積（PCV）（μl）
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裂解緩沖液（μl）
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貼壁細胞
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24孔闆
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~5×105
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~5
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50
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6孔闆
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~2.5×106
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~25
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200
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25cm2培養瓶
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~2×106
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~20
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200
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75cm2培養瓶
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~8×106
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~80
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500
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35
mm培養皿
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~2×106
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~20
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200
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60
mm培養皿
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~5×106
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~50
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500
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100
mm培養皿
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~1.5×107
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調整細胞數目到2-5×106
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200
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注： (二百萬，2×106)HeLa細胞，其細胞沉澱體(tǐ)積（PCV，Packed Cell Volume）大(dà)約爲20 μl。
2. 3 将裂解的細胞轉移到預冷(lěng)的離(lí)心柱中，4℃ 16000g 離(lí)心 1分(fēn)鍾。
注：裂解中細胞會釋放(fàng)出變性的核酸，呈團狀粘稠透明樣，如(rú)移液器不易吸取，可(kě)以将吸頭剪尖，保證将全部裂解物加到離(lí)心柱中。
2. 4 棄去(qù)離(lí)心柱，将收集管中蛋白(bái)溶液轉移至幹淨的 1.5 ml
離(lí)心管中，即可(kě)用于蛋白(bái)濃度測定和後續實驗。
注：如(rú)果收集管中有少許沉澱，隻需收集上清即可(kě)。
三. 懸浮細胞蛋白(bái)提取：
3.1 400 g 4℃ 離(lí)心5 min收集細胞；用1 ml 1×PBS重懸細胞，400 g 4℃ 離(lí)心5 min收集細胞；重複漂洗細胞一次；留下細胞沉澱備用。
3.2 按照(zhào)下表加入相(xiàng)應體(tǐ)積的變性裂解緩沖液，用移液器重懸，冰浴處理(lǐ)5分(fēn)鍾。
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細胞類型
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細胞數量
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細胞沉澱體(tǐ)積（PCV）（μl）
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裂解緩沖液（μl
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懸浮細胞
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1×106
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10
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100
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2×106
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20
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200
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5-10×106
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＞50
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500
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3. 3 将裂解的細胞轉移到預冷(lěng)的離(lí)心柱中，4℃ 16000g 離(lí)心 1分(fēn)鍾。
注：裂解中細胞會釋放(fàng)出變性的核酸，呈團狀粘稠透明樣，如(rú)移液器不易吸取，可(kě)以将吸頭剪尖，保證将全部裂解物加到離(lí)心柱中。
3. 4 棄去(qù)離(lí)心柱，将收集管中蛋白(bái)溶液轉移至幹淨的 1.5 ml
離(lí)心管中，即可(kě)用于蛋白(bái)濃度測定和後續實驗。
注：如(rú)果收集管中有少許沉澱，隻需收集上清即可(kě)。