蛋白(bái)濃縮試劑盒（目錄号：RTD9101）

● 試劑盒内容及保存：

● 儲存條件(jiàn)和效期：

試劑盒常溫運輸；收到後，按照(zhào)标簽溫度貯存；本試劑盒有效期1年(nián)。

● 産品簡介：

試劑盒原理(lǐ)：在酸性條件(jiàn)下蛋白(bái)質形成不溶性鹽，使蛋白(bái)質變性導緻構象發生(shēng)改變，蛋白(bái)暴露出較多的疏水性基團，蛋白(bái)發生(shēng)聚集而沉澱。爲了避免酸對後續電泳的影(yǐng)響，沉澱的蛋白(bái)要使用丙酮等洗滌液徹底清洗去(qù)除酸。濃縮後的蛋白(bái)可(kě)以用于SDS-PAGE和Western blot 前的蛋白(bái)樣品處理(lǐ)。

以每次濃縮800 μl蛋白(bái)樣品計(jì)算，本試劑盒可(kě)以使用40-45次。

● 操作(zuò)方法：

1.  準備1.5 ml幹淨的離(lí)心管，加入800 μl蛋白(bái)樣品溶液。

可(kě)選：如(rú)果樣品溶液中離(lí)子強度低于10 mM，補加8 μl的1M NaCl溶液。低于800 μl的樣品，加入8 μl 1 M NaCl，用水補齊體(tǐ)積至800 μl，使NaCl終濃度爲10 mM。

2. 加入蛋白(bái)溶液1/10體(tǐ)積的試劑C-助沉劑-80 μl，混勻，常溫靜(jìng)置15分(fēn)鍾。

注：加入試劑C後溶液變渾濁。

3.  加入步驟2溶液1/4體(tǐ)積的試劑A -220 μl，渦旋震蕩10-30秒，使之充分(fēn)混勻。

4.  冰浴放(fàng)置15分(fēn)鍾。

5. 4℃，12000 rpm（13000 g）離(lí)心10 分(fēn)鍾。 注：離(lí)心後白(bái)色蛋白(bái)沉澱彌散性可(kě)見(jiàn)于離(lí)心管管壁上。

6.  小心去(qù)掉上清液，保留沉澱。

注：請(qǐng)小心操作(zuò)，可(kě)以用移液器輔助徹底吸棄上清。

7.  沉澱中加入600 μl預冷(lěng)的丙酮（自(zì)備，試劑盒不提供），渦旋震蕩10-30秒，徹底混勻。

   注：丙酮有刺激性氣味，請(qǐng)在通風(fēng)櫥内操作(zuò)。

8.  冰浴15分(fēn)鍾。

9. 4℃，12000 rpm（13000 g) 離(lí)心10分(fēn)鍾；在通風(fēng)櫥中，倒掉上清。殘留上清用10 μl吸頭徹底吸棄，沉澱物通風(fēng)晾幹30-60秒。注：沉澱不能過分(fēn)幹燥，否則将導緻蛋白(bái)不好溶解。

10. 蛋白(bái)溶解：

根據下表選擇溶解緩沖液：

●實驗示例：