DNA退火(huǒ)緩沖液(5×)
● 産品組成：
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貨号
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名稱
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規格
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貯存
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RTE3105
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DNA退火(huǒ)緩沖液(5×)
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5×1ml
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-20℃
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● 保存：-20℃
● 産品簡介：
DNA寡核苷酸退火(huǒ)緩沖液(Annealing
Buffer for DNA Oligos)簡稱爲DNA退火(huǒ)緩沖液，是一種可(kě)用于DNA oligo退火(huǒ)的緩沖液，可(kě)用于常規的DNA oligo的退火(huǒ)，尤其适合于較難退火(huǒ)的用于RNAi (也稱siRNA)質粒構建的DNA oligo的退火(huǒ)。該緩沖液能有效避免DNA oligo自(zì)身(shēn)形成發夾結構，并且兩條oligo退火(huǒ)後可(kě)以直接和經酶切、純化的質粒連接，轉化後可(kě)以得(de)到大(dà)量的陽性克隆。
本試劑操作(zuò)簡單，隻需把待退火(huǒ)的DNA oligo和退火(huǒ)緩沖液按照(zhào)一定比例混合後，置于PCR儀上進行程序降溫，約90min即可(kě)完成。
● 操作(zuò)步驟(僅供參考)：
1、 把待退火(huǒ)的DNA oligo用經滅菌水配制成50μM，同時徹底溶解退火(huǒ)緩沖液（5×）備用。
2、 按如(rú)下反應體(tǐ)系操作(zuò)：
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順序
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組份
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體(tǐ)積
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1
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滅菌水
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40μl
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2
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退火(huǒ)緩沖液(5×)
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20μl
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3
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DNA oligo A(50μM)
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20μl
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4
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DNA oligo B(50μM)
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20μl
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Total
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100μl
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按照(zhào)上述順序，依次加入并混勻，如(rú)果所用PCR儀沒有加熱(rè)蓋，可(kě)加入Mineral Oil防止液體(tǐ)揮發。
3、 按如(rú)下PCR儀的退火(huǒ)條件(jiàn)：
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步驟
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溫度
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時間
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作(zuò)用
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1
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95℃
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2min
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Oligo充分(fēn)變性
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2
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每90s下降1℃，降至25℃
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約90min
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程序退火(huǒ)
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3
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-20℃
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長期保存
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暫時存放(fàng)
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注：如(rú)果使用的PCR儀無梯度降溫功能，也可(kě)以95℃處理(lǐ)後自(zì)然冷(lěng)卻至常溫。