動物/細胞基因組DNA提取試劑盒
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貨号
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名稱
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規格
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RTG2402-01
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動物/細胞基因組DNA提取試劑盒
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50次
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RTG2402-02
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動物/細胞基因組DNA提取試劑盒
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100次
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● 試劑盒内容及保存：
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試劑盒組成
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RTG2402-01
（50次）
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RTG2402-02
（100次）
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貯存方式
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緩沖液GA
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15 ml
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30 ml
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室溫
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緩沖液GB
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15 ml
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30 ml
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室溫
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去(qù)蛋白(bái)液GD（濃縮液）
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18 ml
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36 ml
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室溫
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漂洗液PW（濃縮液）
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25 ml
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25ml
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室溫
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洗脫緩沖液EB
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15 ml
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15 ml
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室溫
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蛋白(bái)酶K（20
mg/ml）
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1ml
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2×1ml
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-20℃
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RNase A（10
mg/ml）
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0.5 ml
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1 ml
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-20℃
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吸附柱CG
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50個
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100個
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室溫
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收集管（2 ml）
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50個
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100個
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室溫
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說(shuō)明書(shū)
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1份
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1份
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● 儲存條件(jiàn)和效期：
本試劑盒在室溫（25℃左右）幹燥條件(jiàn)下，可(kě)保存1年(nián)；更長時間的保存可(kě)置于2–8℃。2–8℃保存條件(jiàn)下，若溶液産生(shēng)沉澱，應在使用前置于37℃下溶解沉澱至溶液澄清後再使用。單獨包裝的蛋白(bái)酶K和RNaseA收到後最好按照(zhào)需要分(fēn)裝成小管，-20℃保存。
● 産品簡介：
本試劑盒采用可(kě)以特異性結合DNA的離(lí)心吸附柱和獨特的緩沖液系統，能提取多種細胞/組織中的基因組DNA。離(lí)心吸附柱可(kě)以高效、專一吸附DNA，可(kě)最大(dà)限度去(qù)除雜質蛋白(bái)及細胞中其他(tā)有機(jī)化合物。提取的基因組DNA片段大(dà)，純度高，質量穩定可(kě)靠。
使用本試劑盒回收的DNA可(kě)适用于各種常規操作(zuò)，包括酶切、PCR、文庫構建、Southern雜交等實驗。
● 提取得(de)率：
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材料
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提取量
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DNA得(de)量
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動物細胞培養液
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106–107 cells
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5–30 μg
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動物組織
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30 mg
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10–30 μg
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● 準備工(gōng)作(zuò)：
1. 準備55℃和70℃水浴；無水乙醇；1.5ml滅菌離(lí)心管。
2. 按照(zhào)标簽所示在去(qù)蛋白(bái)液GD和漂洗液PW中加入無水乙醇，混勻後蓋緊瓶蓋後室溫貯存備用。
3. 每次使用前請(qǐng)檢查緩沖液GA，緩沖液GB和去(qù)蛋白(bái)液GD是否有沉澱生(shēng)成，如(rú)果出現沉澱，37℃溫浴至沉澱溶解後再使用。
● 操作(zuò)步驟：
如(rú)非指出，所有離(lí)心步驟均爲使用台式離(lí)心機(jī)在室溫下離(lí)心。
1. 處理(lǐ)材料：
a.
培養細胞：貼壁培養的細胞應先處理(lǐ)爲細胞懸液（如(rú)用PBS緩沖液或類似緩沖液），10,000 g離(lí)心1分(fēn)鍾，倒盡上清，加入200 μl緩沖液GA，振蕩至徹底懸浮。
b. 組織：取約30mg動物組織（脾組織用量應少于10 mg）加入到事(shì)先盛有200μl 緩沖液GA的1.5ml離(lí)心管中，用研磨杵徹底将組織研碎。
2. 加入20
μl蛋白(bái)酶K (20 mg/ml)溶液。
a. 提取細胞基因組時，加入蛋白(bái)酶K混勻後，55℃放(fàng)置5-10分(fēn)鍾。
b.
提取組織基因組時，加入蛋白(bái)酶K混勻後，在55℃放(fàng)置，直至組織溶解。
注：不同組織裂解時間不同，通常需1-3小時即可(kě)完成（鼠尾需要消化過夜）,期間間歇颠倒混勻樣品。
3. 加入10
μl RNaseA（10 mg/ml）溶液，混勻後室溫放(fàng)置2分(fēn)鍾。
4. 加入220 μl緩沖液GB，充分(fēn)颠倒混勻，70℃放(fàng)置10分(fēn)鍾，溶液應變清亮，簡短(duǎn)離(lí)心以去(qù)除管蓋内壁的水珠。
注：加入緩沖液GB時可(kě)能會産生(shēng)白(bái)色沉澱，一般70℃放(fàng)置一段時間後會消失。如(rú)溶液未變清亮，說(shuō)明細胞裂解不徹底，會影(yǐng)響DNA的純度和得(de)率，而且可(kě)能導緻步驟6中離(lí)心柱堵塞。
5．加入220 μl
無水乙醇，颠倒混勻，簡短(duǎn)離(lí)心以去(qù)除管蓋内壁的水珠。
注：加入乙醇後會産生(shēng)絮狀沉澱，可(kě)用槍頭反複抽打1-2次将沉澱弄碎後再上柱。如(rú)果絮狀物未做處理(lǐ)，容易導緻步驟6中離(lí)心柱的堵塞。
6．将上一步所得(de)溶液和絮狀沉澱都(dōu)加入一個吸附柱CG中（吸附柱放(fàng)入收集管中），11,000g離(lí)心2分(fēn)鍾，倒掉廢液，吸附柱CG放(fàng)回收集管中。
注：如(rú)果出現吸附柱堵塞現象，可(kě)将離(lí)心時間延長到5分(fēn)鍾。
7．向吸附柱CG中加入500
μl去(qù)蛋白(bái)液GD（使用前請(qǐng)先檢查是否已加入無水乙醇），11,000g離(lí)心1分(fēn)鍾，倒掉廢液，吸附柱CG放(fàng)入收集管中。
8．向吸附柱CG中加入700
μl 漂洗液PW（使用前請(qǐng)先檢查是否已加入無水乙醇），11,000g離(lí)心1分(fēn)鍾，倒掉廢液，吸附柱CG放(fàng)入收集管中。
9．向吸附柱CG中加入500
μl 漂洗液PW（使用前請(qǐng)先檢查是否已加入無水乙醇），11,000g離(lí)心1分(fēn)鍾，倒掉廢液。
10．将吸附柱CG放(fàng)回廢液收集管中，11,000g離(lí)心2分(fēn)鍾。
注：此步驟非常重要，目的是将吸附柱中殘餘的漂洗液去(qù)除。漂洗液中乙醇的殘留會影(yǐng)響後續的酶反應（酶切、PCR等）實驗。
11．将吸附柱CG轉入一個幹淨的離(lí)心管中，向吸附膜的中間部位懸空滴加100 μl經70℃水浴預熱(rè)的洗脫緩沖液EB，室溫放(fàng)置2分(fēn)鍾，11,000g離(lí)心2分(fēn)鍾。
注；1. 洗脫緩沖液體(tǐ)積最好不少于100 μl，體(tǐ)積過小影(yǐng)響回收效率。
2. 洗脫液的pH值對于洗脫效率有很大(dà)影(yǐng)響。若用水做洗脫液應保證其pH值在7.0-8.5範圍内，pH值低于7.0會降低洗脫效率。
12. DNA産物-20℃保存。
RTG2402 動物/細胞基因組DNA提取試劑盒産品發表文章(zhāng)
1. [2017 IF=3.974] In vitro and in vivo toxic e?ects and in?ammatory responses induced by carboxylated
black carbon-lead complex exposure.
Author: Shuanglin Jiang,, Mengting Shang,Kui Mu，Nan Jiang，Haiyan Wen，Rong Wang，Hai Wu，Wenyong Li
Product: RTG2402 動物/細胞基因組DNA提取試劑盒
Journal: Ecotoxicology and Environmental
Safety 165 (2018)
484–494
Institution：Key Laboratory
of Embryo Development and Reproductive Regulation of Anhui Province, Fuyang
Normal University
Paper link：http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0147651318309011