2×CTAB提取緩沖液
● 産品編号及規格：
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貨号
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名稱
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規格
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貯存
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RTG2405-200ml
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2×CTAB提取緩沖液
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200 ml
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RT
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還(hái)原劑
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1 ml
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RT
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RTG2405-500ml
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2×CTAB提取緩沖液
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500 ml
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RT
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還(hái)原劑
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1 ml
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RT
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● 産品介紹：
CTAB (hexadecyltrimethylammonium bromide,十六烷基三甲基溴化铵)，是一種陽離(lí)子去(qù)污劑,具有從(cóng)低離(lí)子強度溶液中沉澱核酸與酸性多聚糖的特性。在高離(lí)子強度的溶液中(>0.7 M NaCl) CTAB與蛋白(bái)質和多聚糖形成複合物而不沉澱核酸。通過有機(jī)溶劑抽提，去(qù)除蛋白(bái)、多糖、酚類等雜質後加入醇（乙醇或異丙醇）沉澱即可(kě)使核酸分(fēn)離(lí)出來(lái)。
2×CTAB提取緩沖液成分(fēn)：2%(w/v，55
mM)CTAB，100 mM Tris (pH 8.0)，20
mM EDTA,1.4 MNaCl,，還(hái)原劑(随用随加) 。
● 儲存及運輸：
常溫貯存一年(nián)；常溫運輸。
● 實驗操作(zuò)步驟：
一 DNA提取：
1. 2×即用型CTAB提取液配制：
按照(zhào)終濃度0.2% （v/v）加入還(hái)原劑，如(rú)1 ml 2×CTAB提取緩沖液中加入2 μl還(hái)原劑。2×即用型CTAB提取液建議(yì)現用現配。
2. 材料研磨：
取0.2-0.5克新鮮植物材料，于液氮中研磨成粉末。
3. 樣品裂解：
按照(zhào)每100 mg研磨粉末使用0.5 ml提取緩沖液的比例将粉末轉入1.5
ml離(lí)心管中，立即加入65℃預熱(rè)的2×即用型CTAB提取緩沖液，65℃水浴30分(fēn)鍾，間歇混勻。
注：提取緩沖液使用量不要超過0.7 ml，否則後續純化不能在一個離(lí)心管内完成；CTAB溶液在低于15℃時會形成沉澱析出，因此，在将其加入冰冷(lěng)的植物材料之前必須預熱(rè)，且離(lí)心時溫度不要低于15℃。
4. 離(lí)心去(qù)雜質：
14000 g 常溫離(lí)心5分(fēn)鍾，轉移上清至新的1.5 ml離(lí)心管中。
5. 去(qù)除RNA：
上清中加入1/100上清體(tǐ)積的RNaseA溶液（10
mg/ml）（貨号：RN001），如(rú)500
μl上清中加如(rú)5 μl RNaseA溶液，37℃處理(lǐ)20分(fēn)鍾。
6. 第一次抽提純化：
6.1 步驟5溶液中加入等體(tǐ)積的Tris酚：氯仿：異戊醇（25：24：1），輕緩颠倒離(lí)心管混勻8-10次，常溫14000 g 離(lí)心10分(fēn)鍾，保留上清。
6.2. 重複抽提一次。
7. 第二次純化：
上清中加入等體(tǐ)積氯仿：異戊醇（24:1），颠倒離(lí)心管混勻8-10次，常溫14000 g離(lí)心10分(fēn)鍾，保留上層水相(xiàng)。
8. 沉澱DNA：
8.1 将上層水相(xiàng)轉入新的1.5 ml離(lí)心管中，加入0.6倍體(tǐ)積的冰冷(lěng)異丙醇，輕柔混勻，-20℃靜(jìng)
置30分(fēn)鍾；
8.2 14000
g4℃離(lí)心10分(fēn)鍾。
9. 漂洗DNA：
9.1
去(qù)上清液, 加入1ml
70%乙醇漂洗沉澱，4℃14000 g 3分(fēn)鍾，吸棄乙醇。
9.2 4℃ 14000 g 1分(fēn)鍾，用移液器吸盡殘餘乙醇，超淨台吹幹沉澱。
注：沉澱不能徹底幹燥，否則不好溶解。
10. 貯存DNA：
加入50-100
μl的超純水或TE緩沖液溶解DNA，-20℃保存備用。
二 RNA提取：
注：以下程序請(qǐng)注意所有試劑都(dōu)要保證RNase-free。
1. 2×即用型CTAB提取液（RNase-free，現用現配）配制：
2×CTAB提取緩沖液中按照(zhào)1/1000體(tǐ)積加入DEPC，如(rú)100
ml中加入100 μl DEPC，混勻後過夜處理(lǐ)，高溫高壓，即爲2×即用型CTAB提取緩沖液（RNase-free）。按照(zhào)終濃度1 % （v/v）加入還(hái)原劑，如(rú)1 ml 2×CTAB提取緩沖液（RNase-free）中加入10 μl還(hái)原劑。2×即用型CTAB提取液建議(yì)現用現配。
2. 材料研磨：
取0.2-0.5克新鮮植物材料，于液氮中研磨成粉末。
3. 樣品裂解：
按照(zhào)每100 mg研磨粉末使用0.5 ml提取緩沖液的比例将粉末轉入1.5
ml離(lí)心管中，立即加入65℃預熱(rè)的2×即用型CTAB提取緩沖液，65℃水浴30分(fēn)鍾，間歇混勻。
注：提取緩沖液使用量不要超過0.7 ml，否則後續純化不能在一個離(lí)心管内完成；CTAB溶液在低于15℃時會形成沉澱析出，因此，在将其加入冰冷(lěng)的植物材料之前必須預熱(rè)，且離(lí)心時溫度不要低于15℃。
4. 離(lí)心去(qù)雜質：
14000 g 常溫離(lí)心5分(fēn)鍾，轉移上清至新的1.5 ml離(lí)心管中。
5. 第一次純化：
上清中加入等體(tǐ)積的水酚：氯仿：異戊醇（25：24：1），輕緩颠倒離(lí)心管混勻8-10次，常溫14000 g 離(lí)心10分(fēn)鍾。
6. 第二次純化：
将上清液轉入另一1.5 ml離(lí)心管中，加入等體(tǐ)積氯仿：異戊醇（24：1），颠倒離(lí)心管混勻8-10次，常溫14000 g離(lí)心10分(fēn)鍾。
7. 沉澱RNA：
将上層水相(xiàng)轉入新的1.5 ml離(lí)心管中，加入1/2體(tǐ)積7.5 M LiCl（RNase-free）（貨号：LC1030），輕柔混勻，-20℃ 靜(jìng)置30分(fēn)鍾；14000
g4℃離(lí)心10分(fēn)鍾。
9. 漂洗RNA：
9.1 去(qù)上清液, 沉澱中加入1ml
70%乙醇（RNase-free），吹打漂洗沉澱，14000 g4℃3分(fēn)鍾，吸棄乙醇。
9.2 14000 g4℃1分(fēn)鍾，用移液器吸盡殘餘乙醇，超淨台吹幹沉澱。
注：RNA沉澱不能過分(fēn)幹燥，否則不好溶解。
10. 貯存RNA：
加入50-100
μl的RNase-free水溶解RNA，-80℃保存備用。
使用該産品發表部分(fēn)文章(zhāng)列表：
1. [IF=4.35] Combined Effect of High-Pressure Processing with Spice Extracts on Quality of Low-Salt Sausage during Refrigerated Storage.
Author:Qing Xiao, Mei Xu, Baocai Xu, Conggui Chen, Jieying Deng and Peijun Li
Journal: Foods. 2021, 10, 2610.
Institution：Hefei University of Technology
Paper link：https://www.mdpi.com/2304-8158/10/11/2610
2. [IF=3.579] Effect of Lactobacillus plantarum andStaphylococcus xylosus on flavour development and bacterial communities in Chinese dry fermented sausages.
Author: YaqingXiao,PeijunLi
Journal: Food Research International. 2020.
Institution：Hefei University of Technology
Paper link：https://doi.org/10.1016/j.foodres.2020.109247