2×pfu
PCR MasterMix
● 産品包裝：
|
|
目錄号
|
包裝
|
|
2×pfu PCR
MasterMix（不含染料）
|
RTH3103-02
|
500μl
|
|
RTH3103-03
|
5×500μl
|
|
2×pfu PCR
MasterMix（含染料）
|
RTH3104-02
|
500μl
|
|
RTH3104-03
|
5×500μl
|
注：以50μl PCR反應體(tǐ)系爲例，每次使用25μl 2×MasterMix，500μl可(kě)做20次 50μl PCR反應。
● 儲存條件(jiàn): -20℃可(kě)長期保存；4℃穩定貯存3個月。經常使用時，一旦融化後請(qǐng)4℃貯存，盡量避免反複凍融。
● 産品簡介：
本産品包含pfu DNA聚合酶、dNTPs、Mg2+、反應緩沖液、PCR反應的增強劑和優化劑以及穩定劑，濃度爲2×。使用時，隻需補加實驗所需的引物和模闆後即可(kě)進行PCR反應，可(kě)最大(dà)限度的減少人(rén)爲誤差，具有快(kuài)速簡便、穩定性好等優點。用于高保真的DNA片段的擴增。使用該産品得(de)到的PCR擴增産物爲平滑末端，不可(kě)以直接用于TA克隆，要通過平滑末端克隆法進行克隆。
● 質量控制：
以λ DNA爲模闆，可(kě)以很好擴增5kb的DNA片段；以水稻基因組爲模闆，可(kě)以很好擴增3.2kb的DNA片段。
● 使用說(shuō)明：
1. 冰浴中徹底融化2×MasterMix，混勻後Minispin将溶液收集到管底。
2. 按照(zhào)下表在0.2ml PCR管中制備反應體(tǐ)系：
|
|
50μl反應體(tǐ)系
|
終濃度
|
|
2×MasterMix
|
25μl
|
1×
|
|
上遊引物 10μM
|
1-5μl
|
0.2-0.8
μM
|
|
下遊引物 10μM
|
1-5μl
|
0.2-0.8
μM
|
|
模闆
|
× μl
|
10pg-1μg
|
|
水
|
補至50μl
|
|
3. 快(kuài)甩離(lí)心将反應液收集到管底。
4. PCR儀如(rú)果沒有熱(rè)蓋加熱(rè)的話(huà)，補加25μl礦物油。
5. PCR儀上執行以下程序：
|
步驟
|
溫度
|
時間
|
循環數
|
|
初始變性
|
94℃
|
5 min
|
1
|
|
變性
|
94℃
|
30 sec
|
25-40*
|
|
退火(huǒ)
|
Tm-5℃*
|
30 sec
|
|
延伸
|
72℃
|
0.5kb/min
|
|
最後延伸
|
72℃
|
5 min
|
1
|
*注： PCR 反應條件(jiàn)視模闆、引物等的結構條件(jiàn)不同而各異。在實際操作(zuò)中需根據模闆、目的片段的大(dà)小、堿基序列和引物的長短(duǎn)等具體(tǐ)情況，設定最佳的反應條件(jiàn)（溫度、時間等）。
6. 電泳檢測。
注：使用含染料的2×MasterMix可(kě)以直接上樣；不含染料的2×MasterMix要與6×loading buffer混合後上樣。
1% agarose gel,RealSafe Red stain
lane 1: 1800bp,Rice fragement
lane 2: 1000bp, plasmid fragement
lane 3: 500bp, plasmid fragement