Long Taq DNA Polymerase
長片段DNA聚合酶
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目錄号
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濃度
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包裝
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RTL3102-02
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5 U/μl
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500 U （100μl）
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RTL3102-03
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5 U/μl
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5×500 U（5×100μl）
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● 貯存
-20℃保存一年(nián)。
● 産品簡介
Long Taq DNA Polymerase是由pfu DNA Polymerase和Taq DNA聚合酶按照(zhào)一定的比例混合而成。兩種酶協同作(zuò)用實現了擴增效率、合成速度和延伸性能的完美統一，在長片段PCR反應中具有獨特的優勢，可(kě)以合成超長的DNA片段。另外，此酶具有比Taq DNA聚合酶約5倍的PCR可(kě)信度。該酶的大(dà)多數PCR産物3’端帶堿基A，可(kě)以通過TA克隆法進行克隆。
● 産品組成（RTL3102-02）
Long Taq DNA Polymerase（5U/μl） 100μl
10×Long Taq PCR buffer（含Mg2＋） 1ml
2×GC buffer 2×1 ml
産品組成（RTL3102-03）
Long Taq DNA Polymerase（5U/μl） 5×100μl
10×Long Taq PCR buffer（含Mg2＋） 5×1ml
2×GC buffer 10×1 ml
● 活性定義
1單位(U) Taq DNA Polymerase活力定義爲在74℃、30分(fēn)鍾内，以活性化的大(dà)馬哈魚精子DNA作(zuò)爲模闆/引物，将10 nmol脫氧核苷酸摻入到酸不溶物質所需的酶量。
● 酶貯存緩沖液
50 mM Tris-HCl (pH 8.0);0.1 mMEDTA;1 mMDTT;50 mMKCl ; Stabilizers; 50% glycerol
● 适用範圍
短(duǎn)鏈和長鏈DNA擴增，特别适合于長片段DNA的擴增。
● 使用說(shuō)明：
1. 按照(zhào)下表在0.2ml PCR管中制備反應體(tǐ)系：
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成分(fēn)
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體(tǐ)積
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終濃度
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Template
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0.1-1μg
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as you wish
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Primer 1（10 μM）
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1μl
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200nM
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Primer 2（10 μM）
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1μl
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200nM
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10×Long Taq PCR buffer
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5μl
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1×
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dNTP Mixture(10 mM)
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1μl
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200μM each
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Long Taq (5 U/μl)
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0.5-1μl
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2.5-5U
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ddH2O
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up to 50μl
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-
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2. 混勻後，離(lí)心快(kuài)甩将反應液收集到管底。
3. PCR儀如(rú)果沒有熱(rè)蓋加熱(rè)的話(huà)，補加25μl礦物油。
4. PCR儀上執行以下程序：
三步法：
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步驟
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溫度
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時間
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循環數
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初始變性
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94℃
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1-5 min
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1
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變性
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94℃
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30 sec
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25-40*
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退火(huǒ)
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Tm-5℃*
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30 sec
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延伸
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72℃
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1 min/kb
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最後延伸
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72℃
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5 min
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1
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兩步法：
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步驟
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溫度
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時間
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循環數
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初始變性
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94℃
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1-5 min
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1
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變性
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94℃
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30 sec
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25-40*
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退火(huǒ)和延伸
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68℃
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1 min/kb
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最後延伸
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72℃
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5 min
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1
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*注： PCR 反應條件(jiàn)視模闆、引物等的結構條件(jiàn)不同而各異。在實際操作(zuò)中需根據模闆、目的片段的大(dà)小、堿基序列和引物的長短(duǎn)等具體(tǐ)情況，設定最佳的反應條件(jiàn)（溫度、時間等）。
● 使用舉例：
以λ DNA爲模闆，配合10×Long Taq PCR buffer，可(kě)以很好擴增20kb DNA片段。
以水稻基因組做模闆，配合10×Long Taq PCR buffer可(kě)以很好擴增PEPCase 5.2kb DNA片段。
● 常見(jiàn)問(wèn)題：
Q1： Long Taq DNA polymerase能擴增多長片段？
A1：對簡單模闆（如(rú)λ噬菌體(tǐ)做模闆），可(kě)以擴增20kb片段；對複雜模闆（如(rú)基因組DNA），可(kě)以擴增8kb片段。
Q2：Long Taq DNA polymerase保真性怎樣？
A2：Long Taq含有3’-5’校(xiào)對活性的聚合酶，有校(xiào)對功能。保真性爲普通Taq酶的5倍。
Q3： Long Taq DNA polymerase是否隻能擴增長片段？
A3：Long Taq也能很好的擴增低于5kb的片段，隻是在長片段擴增中更有優勢。
Q4：進行長片段PCR時，爲什麽推薦使用2階段溫度PCR法？
A4：長片段PCR擴增時要設計(jì)比較長的引物，以增加引物的特異性，而長引物的Tm比較高。在進行長片段PCR時，退火(huǒ)溫度和延伸溫度間的差距很小，當退火(huǒ)溫度超過60℃時，退火(huǒ)溫度和延伸溫度可(kě)以設定爲一個溫度，一般爲68℃，這樣進行2階段溫度PCR，在長片段PCR中能得(de)到更好的效果。
Q5：使用Long Taq DNA polymerase的擴增産物是否可(kě)以進行TA克隆？
A5：由于使用Long Taq得(de)到的PCR産物大(dà)多數帶有A，可(kě)以進行TA克隆。然而，如(rú)果想提高TA克隆的連接效率，建議(yì)加A後再進行TA克隆。
Q6：Long Taq DNA polymerase可(kě)以擴增高GC含量片段嗎(ma)？
A6：要擴增高GC含量片段，建議(yì)使用Long Taq配合2×GC buffer使用；不建議(yì)使用10×Long Taq buffer。