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Long Taq DNA聚合酶(含GC buffer)

Long Taq DNA聚合酶(含GC buffer)

産品編号:RTL3102G-02

産品規格:500U

相(xiàng)關規格:
數量
價格 ¥500


 Long Taq DNA Polymerase

長片段DNA聚合酶

目錄号

濃度

包裝

RTL3102-02

5 U/μl

500 U 100μl

RTL3102-03

5 U/μl

5×500 U5×100μl

● 貯存

  -20℃保存一年(nián)。

● 産品簡介

Long Taq DNA Polymerase是由pfu DNA Polymerase和Taq DNA聚合酶按照(zhào)一定的比例混合而成。兩種酶協同作(zuò)用實現了擴增效率、合成速度和延伸性能的完美統一,在長片段PCR反應中具有獨特的優勢,可(kě)以合成超長的DNA片段。另外,此酶具有比Taq DNA聚合酶約5倍的PCR可(kě)信度。該酶的大(dà)多數PCR産物3’端帶堿基A,可(kě)以通過TA克隆法進行克隆。

● 産品組成(RTL3102-02

Long Taq DNA Polymerase(5U/μl)              100μl

10×Long Taq PCR buffer(含Mg2)              1ml

2×GC buffer                                    2×1 ml

 

産品組成(RTL3102-03

Long Taq DNA Polymerase(5U/μl)              5×100μl

10×Long Taq PCR buffer(含Mg2)              5×1ml

2×GC buffer                                    10×1 ml

● 活性定義

1單位(U) Taq DNA Polymerase活力定義爲在74、30分(fēn)鍾内,以活性化的大(dà)馬哈魚精子DNA作(zuò)爲模闆/引物,将10 nmol脫氧核苷酸摻入到酸不溶物質所需的酶量。

● 酶貯存緩沖液

50 mM Tris-HCl (pH 8.0);0.1 mMEDTA;1 mMDTT;50 mMKCl ; Stabilizers; 50% glycerol

● 适用範圍

短(duǎn)鏈和長鏈DNA擴增,特别适合于長片段DNA的擴增。

● 使用說(shuō)明:

1. 按照(zhào)下表在0.2ml PCR管中制備反應體(tǐ)系:

 

成分(fēn)

體(tǐ)積

終濃度

Template

0.1-1μg

as you wish

Primer 110 μM

1μl

200nM

Primer 210 μM

1μl

200nM

10×Long Taq PCR buffer

5μl

dNTP Mixture(10 mM)

1μl

200μM each

Long Taq (5 U/μl)

0.5-1μl

2.5-5U

ddH2O

up to 50μl

-

2. 混勻後,離(lí)心快(kuài)甩将反應液收集到管底。

3. PCR儀如(rú)果沒有熱(rè)蓋加熱(rè)的話(huà),補加25μl礦物油。

4. PCR儀上執行以下程序:

三步法:

步驟

溫度

時間

循環數

初始變性

94

1-5 min

1

變性

94

30 sec

25-40*

退火(huǒ)

Tm-5*

30 sec

延伸

72

1 min/kb

最後延伸

72

5 min

1

兩步法:

步驟

溫度

時間

循環數

初始變性

94

1-5 min

1

變性

94

30 sec

25-40*

退火(huǒ)和延伸

68

1 min/kb

最後延伸

72

5 min

1

*注: PCR 反應條件(jiàn)視模闆、引物等的結構條件(jiàn)不同而各異。在實際操作(zuò)中需根據模闆、目的片段的大(dà)小、堿基序列和引物的長短(duǎn)等具體(tǐ)情況,設定最佳的反應條件(jiàn)(溫度、時間等)。

 

● 使用舉例:

●   常見(jiàn)問(wèn)題:

Q1: Long Taq DNA polymerase能擴增多長片段?

A1:對簡單模闆(如(rú)λ噬菌體(tǐ)做模闆),可(kě)以擴增20kb片段;對複雜模闆(如(rú)基因組DNA),可(kě)以擴增8kb片段。

 

Q2:Long Taq DNA polymerase保真性怎樣?

A2:Long Taq含有3-5校(xiào)對活性的聚合酶,有校(xiào)對功能。保真性爲普通Taq酶的5倍。

 

Q3: Long Taq DNA polymerase是否隻能擴增長片段?

A3:Long Taq也能很好的擴增低于5kb的片段,隻是在長片段擴增中更有優勢。

 

Q4:進行長片段PCR時,爲什麽推薦使用2階段溫度PCR法?

A4:長片段PCR擴增時要設計(jì)比較長的引物,以增加引物的特異性,而長引物的Tm比較高。在進行長片段PCR時,退火(huǒ)溫度和延伸溫度間的差距很小,當退火(huǒ)溫度超過60℃時,退火(huǒ)溫度和延伸溫度可(kě)以設定爲一個溫度,一般爲68℃,這樣進行2階段溫度PCR,在長片段PCR中能得(de)到更好的效果。

 

Q5:使用Long Taq DNA polymerase的擴增産物是否可(kě)以進行TA克隆?

A5:由于使用Long Taq得(de)到的PCR産物大(dà)多數帶有A,可(kě)以進行TA克隆。然而,如(rú)果想提高TA克隆的連接效率,建議(yì)加A後再進行TA克隆。

 

Q6:Long Taq DNA polymerase可(kě)以擴增高GC含量片段嗎(ma)?

A6:要擴增高GC含量片段,建議(yì)使用Long Taq配合2×GC buffer使用;不建議(yì)使用10×Long Taq buffer。



 
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