普通質粒小提試劑盒(目錄号:RTP2102)
● 試劑盒内容及保存:
試劑盒組成
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RTP2102-02 (100次)
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RTP2102-03 (200次)
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貯存
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RNase
A
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300
μl
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600
μl
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-20℃
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Lysis
Dye
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600μl
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2×600μl
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室溫
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溶液P1
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30
ml
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60
ml
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室溫 (加入RNase A後2-8℃保存)
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溶液P2
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30
ml
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60
ml
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室溫
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溶液P3
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40
ml
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80
ml
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室溫
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漂洗液PW
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25
ml
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2×25
ml
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室溫
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洗脫緩沖液EB
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15
ml
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15
ml
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室溫
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質粒吸附柱CP
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100個
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200個
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室溫
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收集管(2
ml)
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100個
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200個
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室溫
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說(shuō)明書(shū)
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1份
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1份
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● 儲存條件(jiàn)和效期:
本試劑盒在室溫(25℃左右)幹燥條件(jiàn)下,可(kě)保存1年(nián);更長時間的保存可(kě)置于2–8℃。2–8℃保存條件(jiàn)下,若溶液産生(shēng)沉澱,應在使用前置于37℃下溶解沉澱至溶液澄清後再使用。單獨包裝的RNase
A 在-20℃可(kě)穩定保存1年(nián)以上。加入RNase
A後的溶液P1應置于2–8℃保存,可(kě)穩定保存半年(nián)。
● 産品簡介及使用說(shuō)明:
本試劑盒采用經典的堿裂解法裂解細菌,再通過離(lí)心吸附柱在高鹽狀态下特異性地結合DNA的特性,可(kě)以從(cóng)1–5ml大(dà)腸杆菌LB培養液中快(kuài)速提取3–20μg純淨的高拷貝質粒DNA。提取的質粒可(kě)适用于各種常規操作(zuò),包括酶切、PCR、測序、連接和轉化等實驗。然而,對質粒純度要求更高的轉染實驗(要求無内毒素),此試劑盒不能達到要求。另外,盡管該試劑盒可(kě)以抽提較大(dà)的質粒(>10kb),但(dàn)我們不推薦使用。如(rú)果一定要使用,請(qǐng)參考以下方法:加大(dà)菌體(tǐ)使用量(使用5–10 ml過夜培養物),同時按照(zhào)比例增加P1、P2、P3的用量;洗脫緩沖液應在70℃預熱(rè),在吸附和洗脫時可(kě)以适當的延長時間,以增加提取效率,其它步驟相(xiàng)同。
● 産品特點:
使用了Lysis Dye,菌體(tǐ)裂解是否完全一目了然。由于判斷菌體(tǐ)裂解和中和是否徹底更主要取決于操作(zuò)者的經驗,所以我們增加了Lysis Dye(一種能使裂解/中和體(tǐ)系變換顔色的試劑)來(lái)幫助觀察裂解/中和的程度。加入P1後,Lysis Dye使菌液變爲渾濁的紅(hóng)色;加入P2後,Lysis Dye立即使溶液變爲澄清的紅(hóng)色,裂解是否完全隻要觀察紅(hóng)色溶液是否澄清,如(rú)果紅(hóng)色非常均一,表明裂解充分(fēn);在完全裂解的體(tǐ)系中加入P3混勻後,體(tǐ)系立即變爲黃(huáng)色,任何紅(hóng)色的殘留表明沒有完全混勻或者中和不徹底。
● 準備工(gōng)作(zuò):
1 将試劑盒附帶的RNase
A全部加入到溶液P1中(如(rú)15ml P1中加入150μl
RNase A),混勻後4℃貯存。
2 按照(zhào)标簽所示在漂洗液PW中加入無水乙醇,混勻後蓋緊瓶蓋後室溫貯存備用。
3 每次使用前請(qǐng)檢查溶液P2、溶液P3是否有沉澱生(shēng)成,如(rú)果出現沉澱,37℃溫浴至沉澱溶解後再使用。
● 使用Lysis Dye的标準操作(zuò)步驟:
如(rú)非指出,所有離(lí)心步驟均爲使用台式離(lí)心機(jī)在室溫下離(lí)心。
1. 取1–5 ml過夜培養的菌液加入離(lí)心管中,10,000g 離(lí)心1分(fēn)鍾,盡量吸除上清。
注:菌液較多時可(kě)以通過幾次離(lí)心将菌體(tǐ)沉澱收集到一個離(lí)心管中。
2. 向菌體(tǐ)沉澱的離(lí)心管中加入250 μl溶液P1(請(qǐng)先檢查是否已加入RNaseA)和5μl Lysis Dye,使用移液器或渦旋振蕩器徹底懸浮細菌細胞沉澱,此時溶液爲渾濁的紅(hóng)色。
注:如(rú)果有未徹底混勻的菌塊,會影(yǐng)響裂解,導緻提取量和純度偏低。
3. 加入250 μl溶液P2,溫和地上下翻轉6–8次使菌體(tǐ)充分(fēn)裂解,此時溶液變爲澄清的紅(hóng)色。
注:溫和地混合,不要劇(jù)烈震蕩,以免污染基因組DNA;所用時間絕對不應超過5分(fēn)鍾 ,以免質粒受到破壞;紅(hóng)色溶液應該透明均一,如(rú)有渾濁紅(hóng)色顆粒,表明裂解不充分(fēn),會大(dà)大(dà)降低質粒提取效率。
4. 加入350 μl溶液P3,立即溫和地上下翻轉,充分(fēn)混勻,混勻充分(fēn)的标志是溶液完全呈透明的黃(huáng)色,如(rú)有可(kě)見(jiàn)紅(hóng)色,說(shuō)明混勻不徹底。10,000g 離(lí)心10分(fēn)鍾。
注:P3加入後應立即混合,避免産生(shēng)局部沉澱。
左側未完全混勻,有紅(hóng)色;右側完全混勻,呈均勻黃(huáng)色
5. 小心地将上清轉移到吸附柱CP中(吸附柱放(fàng)入收集管中),10,000g離(lí)心30–60秒,倒掉收集管中的廢液,将吸附柱CP重新放(fàng)回收集管中。
6. 向吸附柱CP中加入700 μl漂洗液PW(請(qǐng)先檢查是否已加入無水乙醇),10,000g 離(lí)心30–60秒,倒掉收集管中的廢液,将吸附柱CP重新放(fàng)回收集管中。
7 向吸附柱CP中加入500
μl漂洗液PW,10,000g 離(lí)心30–60秒,倒掉收集管中的廢液。
8. 将吸附柱CP重新放(fàng)回收集管中,10,000g 離(lí)心2分(fēn)鍾。
注:此步驟目的是将吸附柱中殘餘的漂洗液去(qù)除,絕對不可(kě)省略,因爲漂洗液中乙醇的殘留會影(yǐng)響後續實驗(酶切,PCR等)。
9. 将吸附柱CP置于一個幹淨的1.5ml離(lí)心管中,向吸附膜的中央部位懸空滴加50–100
μl洗脫緩沖液EB,室溫放(fàng)置2分(fēn)鍾,10,000g離(lí)心2分(fēn)鍾将質粒溶液收集到離(lí)心管中,-20℃保存。
注:● 爲了增加質粒的回收效率,可(kě)将得(de)到的洗脫液重新加入離(lí)心吸附柱中,再次離(lí)心收集。
● 洗脫緩沖液體(tǐ)積不應少于50
μl,體(tǐ)積過小影(yǐng)響回收效率。
● 洗脫液的pH值對于洗脫效率有很大(dà)影(yǐng)響。若用水做洗脫液應保證其pH值在7.0-8.5範圍内,pH值低于7.0會降低洗脫效率。
●不使用Lysis Dye的标準操作(zuò)步驟:
如(rú)非指出,所有離(lí)心步驟均爲使用台式離(lí)心機(jī)在室溫下離(lí)心。
1. 取1–5 ml過夜培養的菌液加入離(lí)心管中,10,000
g離(lí)心1分(fēn)鍾,盡量吸除上清。
注:菌液較多時可(kě)以通過幾次離(lí)心将菌體(tǐ)沉澱收集到一個離(lí)心管中。
2. 向菌體(tǐ)沉澱的離(lí)心管中加入250 μl溶液P1(請(qǐng)先檢查是否已加入RNaseA),使用移液器或渦旋振蕩器徹底懸浮細菌細胞沉澱。
注:如(rú)果有未徹底混勻的菌塊,會影(yǐng)響裂解,導緻提取量和純度偏低。
3. 加入250 μl溶液P2,溫和地上下翻轉6–8次使菌體(tǐ)充分(fēn)裂解。
注:溫和地混合,不要劇(jù)烈震蕩,以免污染基因組DNA;所用時間絕對不應超過5分(fēn)鍾,以免質粒受到破壞。
4. 加入350 μl溶液P3,立即溫和地上下翻轉6–8次,充分(fēn)混勻,此時會出現白(bái)色絮狀沉澱。10,000g 離(lí)心10分(fēn)鍾。
注:P3加入後應立即混合,避免産生(shēng)局部沉澱。如(rú)果上清中還(hái)有微小白(bái)色沉澱,可(kě)再次離(lí)心後取上清。
5. 小心地将上清轉移到吸附柱CP中(吸附柱放(fàng)入收集管中),10,000g 離(lí)心30–60秒,倒掉收集管中的廢液,将吸附柱CP重新放(fàng)回收集管中。
6. 向吸附柱CP中加入700 μl漂洗液PW(請(qǐng)先檢查是否已加入無水乙醇),10,000g 離(lí)心30–60秒,倒掉收集管中的廢液,将吸附柱CP重新放(fàng)回收集管中。
7 向吸附柱CP中加入500
μl漂洗液PW,10,000g 離(lí)心30–60秒,倒掉收集管中的廢液。
8. 将吸附柱CP置于收集管中,10,000g 離(lí)心2分(fēn)鍾。
注:此步驟目的是将吸附柱中殘餘的漂洗液去(qù)除,絕對不可(kě)省略,因爲漂洗液中乙醇的殘留會影(yǐng)響後續實驗(酶切,PCR等)。
9. 将吸附柱CP置于一個幹淨的1.5ml離(lí)心管中,向吸附膜的中央部位懸空滴加50–100
μl洗脫緩沖液EB,室溫放(fàng)置2分(fēn)鍾,10,000g離(lí)心2分(fēn)鍾将質粒溶液收集到離(lí)心管中,-20℃保存。
注:● 爲了增加質粒的回收效率,可(kě)将得(de)到的洗脫液重新加入離(lí)心吸附柱中,再次離(lí)心收集。
● 洗脫緩沖液體(tǐ)積不應少于50 μl,體(tǐ)積過小影(yǐng)響回收效率。
● 洗脫液的pH值對于洗脫效率有很大(dà)影(yǐng)響。若用水做洗脫液應保證其pH值在7.0-8.5範圍内,pH值低于7.0會降低洗脫效率。
質粒提取試劑盒 RTP2101/RTP2102發表文章(zhāng)
1. A weird DNA band in PCR and its cause.
Author: Chang Shenghe, Sun Wei, Zhou Zhaoxi, Li Jingyang, Dai Minjie, Shu Haiyan
Product: RTP2102 普通質粒小提試劑盒
Journal: Journal of Plant Science & Molecular
Breeding Volume 5 Article 2 2016
Institution:Haikou
experimental station, Chinese Academy of Tropical Agricultural Sciences
Paper link:https://doi.org/10.7243/2050-2389-5-2
2. [2017 IF=4.076] Application of Real-Time Quantitative PCR
to Detect Mink Circovirus in Naturally and Experimentally Infected Minks.
Author: Xingyang Cui, Yunjia Shi, Lili Zhao, Shanshan Gu, Chengwei Wei, Yan
Yang,Shanshan Wen, Hongyan Chen and Junwei Ge
Product: RTP2102 普通質粒小提試劑盒
Journal: Fronties in Microbiology May 2018 | Volume 9 | Article 937
Institution:College of
Veterinary Medicine, Northeast Agricultural University
Paper link:https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/29867846
3. [2018 IF=8.063] ATF4 destabilizes RET through nonclassical
GRP78 inhibition to enhance chemosensitivity to bortezomib in human
osteosarcoma
Author: Jie Luo, Yuanzheng Xia, Yong Yin, Jun Luo, Mingming Liu, Hao Zhang, Chao
Zhang, Yucheng Zhao, Lei Yang, and Lingyi Kong
Product: RTP2101 高純質粒小提試劑盒
Journal: Theranostics 2019, Vol. 9, Issue 21
Institution:School of
Traditional Chinese Pharmacy, China Pharmaceutical University
Paper link:https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/31534554
4. [2020 IF=1.336] Isopentenyl Diphosphate Isomerase (IPI)
Gene Silencing Negatively Afects Patchouli Alcohol Biosynthesis
in Pogostemon cablin
Author: Wuping Yan,Yuzhang Yang,Yougen Wu,Jing Yu,Junfeng Zhang,
Dongmei Yang, Zeeshan Ul Haq Muhammad
Product: RTP2102 普通質粒小提試劑盒
Journal: Plant Molecular Biology Reporter Published 27 January 2021
Institution:College
of Horticulture, Hainan University
Paper link:https://link.springer.com/article/10.1007/s11105-020-01269-0
5. [2022 IF=2] Genomic characterization and phylogenetic
analysis of Aleutian mink disease virus identified in a sudden death mink case
Author: Xingyang Cui, Yan Yang, Fang Wang, Jilong Luo, Ping Zhang, Hongyan Chen,
Lili Zhao, Junwei Ge
Product: RTP2102 普通質粒小提試劑盒
Journal: Comparative Immunology, Microbiology
and Infectious Diseases. Vo101, October 2023, 102052
Institution:College of
Veterinary Medicine, Northeast Agricultural University
Paper link:https://www.sciencedirect.com/science/article/abs/pii/S0147957123001108