PAGE凝膠DNA回收試劑盒（吸附柱法）（目錄号：RTP3104）

● 試劑盒内容及保存：

● 運輸、儲存條件(jiàn)和效期：

常溫運輸，常溫保存，有效期爲一年(nián)。

● 産品簡介及使用說(shuō)明：

本試劑盒适用于從(cóng)PAGE 膠中回收50-500 bp 的雙鏈DNA 片段，回收效率可(kě)達30-80%。該試劑盒采用特殊的吸附膜，能夠有選擇性地吸附核酸分(fēn)子，去(qù)除其他(tā)雜質，得(de)到高質量的DNA回收産物。所得(de)到的DNA可(kě)直接用于酶切、連接、測序等後續的分(fēn)子生(shēng)物學試驗。

注：該試劑盒也能回收單鏈DNA片段，但(dàn)回收效率偏低。

本試劑盒具有以下特點：

1. 适用範圍廣，回收效率高，對于50-500 bp之間的DNA片段，回收效率在30-80%。

2. 操作(zuò)簡單快(kuài)速

3. 無需酚氯仿抽提，無需乙醇沉澱。

按照(zhào)每次使用200 μl提取液A計(jì)算，試劑盒可(kě)以使用50次。

● 使用方法：

1.電泳：

PAGE電泳後染色觀察DNA 并确定需要回收的DNA 條帶的位置，确保目的DNA片段與其他(tā)片段分(fēn)開。

2.切膠：

用幹淨的刀片小心切取含DNA片段的PAGE凝膠到一個幹淨的1.5 ml離(lí)心管中。

注：盡可(kě)能多地把多餘的膠切除，否則多餘的凝膠會降低DNA的回收效率。

3.DNA提取：

3.1 根據膠塊重量，每100 mg膠塊加200 μl比例加入提取液A（如(rú)膠塊不足100 mg，用滅菌水補足100 mg），用塑料研磨杵充分(fēn)将凝膠塊搗碎。

注：膠的重量控制在0.3克以下爲宜，否則會導緻DNA片段擴散提取不完全。

3.2  55℃水浴30分(fēn)鍾，間隙混勻，促進凝膠中的DNA擴散到溶液中。

3.3  13000 rpm離(lí)心5分(fēn)鍾，小心将上清液(含DNA片段)轉移到一個新的1.5 ml離(lí)心管中。

4. 上清液中依次加入3倍上清體(tǐ)積結合液B和1倍上清體(tǐ)積的助沉劑C，混勻。

注：如(rú)果此時溶液變爲粉紅(hóng)色，請(qǐng)加入少量3MNaAc pH5.2（一般說(shuō)來(lái)，10 μl足矣），使溶膠液變爲黃(huáng)色再上柱離(lí)心。

5. 将上一步所得(de)溶液加入到吸附柱CA1中（吸附柱放(fàng)入收集管中），常溫放(fàng)置2分(fēn)鍾，13,000 rpm離(lí)心60秒，倒掉收集管中的廢液，将吸附柱重新放(fàng)入收集管中。

注：吸附柱CA1的有效容積爲750 μl，如(rú)溶液體(tǐ)積大(dà)于750 μl，分(fēn)次上柱，保證全部溶液都(dōu)加到吸附柱中。

6. 向吸附柱CA1中加入700 μl漂洗液PW（使用前請(qǐng)先檢查是否已加入無水乙醇），13,000 rpm離(lí)心60秒，倒掉廢液，将吸附柱重新放(fàng)入收集管中。

7. 向吸附柱CA1中加入500 μl漂洗液PW，13,000 rpm離(lí)心30-60秒，倒掉廢液。

8. 将離(lí)心吸附柱CA1放(fàng)回收集管中，13,000 rpm離(lí)心2分(fēn)鍾，盡量除去(qù)漂洗液。

注：此步必不可(kě)少！如(rú)果漂洗液有殘留會影(yǐng)響回收效率和DNA質量，進而影(yǐng)響下遊實驗；離(lí)心後将吸附柱蓋子打開，常溫放(fàng)置2分(fēn)鍾，這樣将有助于徹底揮發殘餘乙醇。

9. 将吸附柱放(fàng)到一個幹淨1.5 ml離(lí)心管中，向吸附膜中間位置懸空滴加适量65℃預熱(rè)的洗脫緩沖液EB（一般不要少于30 μl），常溫放(fàng)置2分(fēn)鍾。13,000 rpm離(lí)心1分(fēn)鍾收集DNA溶液。

注：CA1柱的洗脫體(tǐ)積不應少于30 μl，體(tǐ)積過小将會降低回收效率；洗脫液的pH值對于洗脫效率有很大(dà)影(yǐng)響。由于PAGE膠中片段較小，不建議(yì)用水進行洗脫。

10. DNA産物-20℃保存。

● 實驗示例：