Bradford蛋白(bái)濃度測定試劑盒
名稱
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貨号
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規格
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Bradford蛋白(bái)濃度測定試劑盒
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RTP7101
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1000次(微孔闆)
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● 試劑盒内容及保存:
貨号
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産品名稱
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包裝
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貯存方式
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RTP7101-01
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考馬斯亮藍G-250染色液
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200
ml
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4℃
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BSA-01
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牛血清白(bái)蛋白(bái)(BSA)标準溶液(5 mg/ml)
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2×1 ml
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-20℃
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RT0280-02
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PBS溶液
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10
ml
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4℃
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說(shuō)明書(shū)
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1份
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● 儲存條件(jiàn)和效期:
考馬斯亮藍G-250染色液4℃避光(guāng)保存;牛血清白(bái)蛋白(bái)标準溶液-20℃貯存。PBS溶液4℃貯存。試劑盒常溫運輸;本試劑盒有效期1年(nián)。
● 産品簡介:
Bradford蛋白(bái)質濃度測定試劑盒是根據考馬斯亮藍G-250(Coomassie
brilliant blue G-250)法研制而成,其原理(lǐ)是考馬斯亮藍G-250在酸性條件(jiàn)下和蛋白(bái)質結合,使得(de)染料最大(dà)吸收峰從(cóng)465 nm變爲595 nm,在一定的線性範圍内,反應液595 nm處吸光(guāng)度的變化量與反應蛋白(bái)量成正比,測定595 nm處吸光(guāng)度的增加即可(kě)進行蛋白(bái)定量。
每個試劑盒可(kě)以檢測1000個樣品(使用微孔闆)或60個樣品(使用試管)
● 産品特點:
1.
檢測速度極快(kuài),10個樣品隻需不足10分(fēn)鍾即可(kě)完成。
2.
靈敏度高,檢測濃度下限可(kě)達25
μg/ml (測定濃度範圍在25-1000 μg/ml内有較好的線性關系,最佳測定濃度範圍爲50-750
μg/ml),最小檢測蛋白(bái)量可(kě)達0.5
μg,待測樣品體(tǐ)積爲1-20 μl。
3.
Bradford法測定蛋白(bái)濃度不受絕大(dà)部分(fēn)樣品中的化學物質的影(yǐng)響。樣品中β-巯基乙醇的濃度可(kě)高達1
M,DTT的濃度可(kě)高達5
mM。然而,此方法測定蛋白(bái)濃度受高濃度的去(qù)垢劑影(yǐng)響,故不能适用膜蛋白(bái)樣品的濃度測定。需确保測定樣品中SDS濃度低于0.01%,Triton
X-100濃度低于0.05%,Tween
20, 60, 80濃度低于0.015%。測定含去(qù)垢劑的樣品推薦使用BCA蛋白(bái)濃度測定試劑盒(RTP7102)。
● 操作(zuò)方法
微孔闆測定程序:(最優工(gōng)作(zuò)範圍50-750 μg/ml)
1. G-250染液在使用前應平衡溫度至室溫并溫和颠倒混勻;
2. 1 mg/ml蛋白(bái)标準品配制:常溫完全溶解蛋白(bái)标準品,取25 μl 5mg/ml BSA蛋白(bái)标準溶液,加入100 μl PBS溶液,使其終濃度爲1 mg/ml。
3. 按照(zhào)下表配制BSA标準測定溶液,建議(yì)做3個重複:
編号
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0
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1
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2
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3
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4
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5
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6
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7
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1 mg/ml BSA标準溶液 μl
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BSA标準溶液 μl
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0
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1
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1.5
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2
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3
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6
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10
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15
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PBS 溶液 μl
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20
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19
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18.5
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18
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17
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14
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10
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5
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BSA終濃度 μg/ml
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0
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50
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75
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100
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150
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300
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500
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750
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總體(tǐ)積
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20 μl
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4. 将适當體(tǐ)積的待測樣品加入到微孔闆中,并用PBS補足到20 μl;
5. 向微孔闆中加入200 μl G-250染色液,混勻,室溫放(fàng)置5分(fēn)鍾;
6. 測定595 nm 處的吸光(guāng)值,并記錄讀(dú)數;以不含BSA 的樣品的光(guāng)吸收值作(zuò)爲空白(bái)對照(zhào)。
7. 以BSA含量爲縱坐(zuò)标A595讀(dú)數爲橫坐(zuò)标,繪制标準曲線,計(jì)算樣品中的蛋白(bái)濃度。如(rú)果所得(de)到的蛋白(bái)濃度不在标準曲線範圍内,請(qǐng)稀釋樣品後重新測定。
試管測定程序:(最優工(gōng)作(zuò)範圍50-750 μg/ml)
1. G-250染液在使用前應平衡溫度至室溫并溫和颠倒混勻;
2. 1mg/ml蛋白(bái)标準品配制:室溫完全溶解蛋白(bái)标準品,取360 μl 5mg/ml BSA蛋白(bái)标準溶液,加入1440 μl PBS溶液,使其終濃度爲1.0 mg/ml。
3. 按照(zhào)下表配制BSA标準測定溶液,建議(yì)做3個重複:
編号
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0
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1
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2
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3
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4
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5
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6
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7
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1 mg/ml BSA标準溶液 μl
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BSA标準溶液 μl
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0
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10
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15
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20
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30
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60
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100
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150
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PBS 溶液 μl
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200
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190
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185
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180
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170
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140
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100
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50
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BSA終濃度 μg/ml
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0
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50
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75
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100
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150
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300
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500
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750
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總體(tǐ)積
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200 μl
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4. 将适當體(tǐ)積的待測樣品加入到試管中,并用PBS補足到200 μl;
5. 向試管中加入3ml G-250染色液,混勻,室溫放(fàng)置3-5分(fēn)鍾;
6. 測定595
nm 處的吸光(guāng)值,并記錄讀(dú)數;以不含BSA 的樣品的光(guāng)吸收值作(zuò)爲空白(bái)對照(zhào)。
7. 以BSA含量爲縱坐(zuò)标A595讀(dú)數爲橫坐(zuò)标,繪制标準曲線,計(jì)算樣品中的蛋白(bái)濃度。如(rú)果所得(de)到的蛋白(bái)濃度不在标準曲線範圍内,請(qǐng)稀釋樣品後重新測定。
實驗示例:
引用RTP7101 Bradford蛋白(bái)濃度測定試劑盒發表文章(zhāng)
使用該産品發表部分(fēn)文章(zhāng)列表:
1. [2013 IF=3.5] Identification of Novel
Surface-Exposed Proteins of Rickettsia rickettsii by Affinity Purification and
Proteomics.
Author: Wenping Gong, Xiaolu Xiong, Yong Qi, Jun Jiao, Changsong
Duan, Bohai Wen
Journal: Plos One. June 2014 | Volume 9 |
Issue 6 | e100253
Institution: State Key Laboratory of
Pathogen and Biosecurity, Beijing Institute of Microbiology and Epidemiology
Paper link: https://journals.plos.org/plosone/article?id=10.1371/journal.pone.0100253