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Bradford蛋白(bái)濃度測定試劑盒

Bradford蛋白(bái)濃度測定試劑盒

産品編号:RTP7101

産品規格:1000次

數量
價格 ¥200


Bradford蛋白(bái)濃度測定試劑盒


 

名稱

貨号

規格

Bradford蛋白(bái)濃度測定試劑盒

RTP7101

1000次(微孔闆)

試劑盒内容及保存:

貨号

産品名稱

包裝

貯存方式

RTP7101-01

考馬斯亮藍G-250染色液

200 ml

4

BSA-01

牛血清白(bái)蛋白(bái)(BSA)标準溶液(5 mg/ml

2×1 ml

-20

RT0280-02

PBS溶液

10 ml

4

 

說(shuō)明書(shū)

1

 

儲存條件(jiàn)和效期:

考馬斯亮藍G-250染色液4℃避光(guāng)保存;牛血清白(bái)蛋白(bái)标準溶液-20℃貯存。PBS溶液4℃貯存。試劑盒常溫運輸;本試劑盒有效期1年(nián)。

産品簡介:

Bradford蛋白(bái)質濃度測定試劑盒是根據考馬斯亮藍G-250(Coomassie brilliant blue G-250)法研制而成,其原理(lǐ)是考馬斯亮藍G-250在酸性條件(jiàn)下和蛋白(bái)質結合,使得(de)染料最大(dà)吸收峰從(cóng)465 nm變爲595 nm,在一定的線性範圍内,反應液595 nm處吸光(guāng)度的變化量與反應蛋白(bái)量成正比,測定595 nm處吸光(guāng)度的增加即可(kě)進行蛋白(bái)定量。

每個試劑盒可(kě)以檢測1000個樣品(使用微孔闆)或60個樣品(使用試管)

産品特點:

1. 檢測速度極快(kuài),10個樣品隻需不足10分(fēn)鍾即可(kě)完成。

2. 靈敏度高,檢測濃度下限可(kě)達25 μg/ml (測定濃度範圍在25-1000 μg/ml内有較好的線性關系,最佳測定濃度範圍爲50-750 μg/ml),最小檢測蛋白(bái)量可(kě)達0.5 μg,待測樣品體(tǐ)積爲1-20 μl。

3. Bradford法測定蛋白(bái)濃度不受絕大(dà)部分(fēn)樣品中的化學物質的影(yǐng)響。樣品中β-巯基乙醇的濃度可(kě)高達1 M,DTT的濃度可(kě)高達5 mM。然而,此方法測定蛋白(bái)濃度受高濃度的去(qù)垢劑影(yǐng)響,故不能适用膜蛋白(bái)樣品的濃度測定。需确保測定樣品中SDS濃度低于0.01%,Triton X-100濃度低于0.05%,Tween 20, 60, 80濃度低于0.015%。測定含去(qù)垢劑的樣品推薦使用BCA蛋白(bái)濃度測定試劑盒(RTP7102)。

 

 

操作(zuò)方法

微孔闆測定程序:(最優工(gōng)作(zuò)範圍50-750 μg/ml

1.  G-250染液在使用前應平衡溫度至室溫并溫和颠倒混勻;

2.  1 mg/ml蛋白(bái)标準品配制:常溫完全溶解蛋白(bái)标準品,取25 μl 5mg/ml BSA蛋白(bái)标準溶液,加入100 μl PBS溶液,使其終濃度爲1 mg/ml

3.  按照(zhào)下表配制BSA标準測定溶液,建議(yì)做3個重複:

編号

0

1

2

3

4

5

6

7

 

1 mg/ml BSA标準溶液 μl

BSA标準溶液 μl

0

1

1.5

2

3

6

10

15

PBS 溶液 μl

20

19

18.5

18

17

14

10

5

BSA終濃度 μg/ml

0

50

75

100

150

300

500

750

總體(tǐ)積

20 μl

4.  将适當體(tǐ)積的待測樣品加入到微孔闆中,并用PBS補足到20 μl

5.  向微孔闆中加入200 μl G-250染色液,混勻,室溫放(fàng)置5分(fēn)鍾;

6.  測定595 nm 處的吸光(guāng)值,并記錄讀(dú)數;以不含BSA 的樣品的光(guāng)吸收值作(zuò)爲空白(bái)對照(zhào)。

7.  BSA含量爲縱坐(zuò)标A595讀(dú)數爲橫坐(zuò)标,繪制标準曲線,計(jì)算樣品中的蛋白(bái)濃度。如(rú)果所得(de)到的蛋白(bái)濃度不在标準曲線範圍内,請(qǐng)稀釋樣品後重新測定。

試管測定程序:(最優工(gōng)作(zuò)範圍50-750 μg/ml

1. G-250染液在使用前應平衡溫度至室溫并溫和颠倒混勻;

2. 1mg/ml蛋白(bái)标準品配制:室溫完全溶解蛋白(bái)标準品,取360 μl 5mg/ml BSA蛋白(bái)标準溶液,加入1440 μl PBS溶液,使其終濃度爲1.0 mg/ml

3. 按照(zhào)下表配制BSA标準測定溶液,建議(yì)做3個重複:

編号

0

1

2

3

4

5

6

7

 

1 mg/ml BSA标準溶液 μl

BSA标準溶液 μl

0

10

15

20

30

60

100

150

PBS 溶液 μl

200

190

185

180

170

140

100

50

BSA終濃度 μg/ml

0

50

75

100

150

300

500

750

總體(tǐ)積

200 μl

4. 将适當體(tǐ)積的待測樣品加入到試管中,并用PBS補足到200 μl

5. 向試管中加入3ml G-250染色液,混勻,室溫放(fàng)置3-5分(fēn)鍾;

6. 測定595 nm 處的吸光(guāng)值,并記錄讀(dú)數;以不含BSA 的樣品的光(guāng)吸收值作(zuò)爲空白(bái)對照(zhào)。

7. BSA含量爲縱坐(zuò)标A595讀(dú)數爲橫坐(zuò)标,繪制标準曲線,計(jì)算樣品中的蛋白(bái)濃度。如(rú)果所得(de)到的蛋白(bái)濃度不在标準曲線範圍内,請(qǐng)稀釋樣品後重新測定。

 

實驗示例:


引用RTP7101 Bradford蛋白(bái)濃度測定試劑盒發表文章(zhāng)

使用該産品發表部分(fēn)文章(zhāng)列表:

1. [2013 IF=3.5] Identification of Novel Surface-Exposed Proteins of Rickettsia rickettsii by Affinity Purification and Proteomics.

Author: Wenping Gong, Xiaolu Xiong, Yong Qi, Jun Jiao, Changsong Duan, Bohai Wen

Journal: Plos One. June 2014 | Volume 9 | Issue 6 | e100253

InstitutionState Key Laboratory of Pathogen and Biosecurity, Beijing Institute of Microbiology and Epidemiology

Paper link https://journals.plos.org/plosone/article?id=10.1371/journal.pone.0100253

 


 
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