Bradford蛋白(bái)濃度測定試劑盒（去(qù)垢劑兼容型）

Bradford Protein Assay Kit（Detergent Compatible）

● 試劑盒内容及保存：

● 儲存條件(jiàn)和效期：

考馬斯亮藍G-250染色液（去(qù)垢劑兼容型）4℃貯存；牛血清白(bái)蛋白(bái)标準溶液-20℃貯存。PBS溶液4℃貯存。本試劑盒有效期1年(nián)。試劑盒常溫運輸。

● 産品簡介：

Bradford蛋白(bái)濃度測定試劑盒(去(qù)垢劑兼容型)其原理(lǐ)是考馬斯亮藍G-250在酸性條件(jiàn)下和蛋白(bái)質結合，使得(de)染料最大(dà)吸收峰從(cóng)465nm變爲595nm，在一定的線性範圍内，反應液595nm處吸光(guāng)度的變化量與反應蛋白(bái)量成正比，測定595nm處吸光(guāng)度的增加即可(kě)進行蛋白(bái)定量。該試劑盒進行了優化，能兼容一系列常見(jiàn)去(qù)垢劑和一定濃度的還(hái)原劑，并且檢測數據有很好的線性關系。本試劑盒的性能不僅優于常規的Bradford法，和BCA法相(xiàng)比也更加快(kuài)速便捷。

蛋白(bái)研究中許多蛋白(bái)樣品都(dōu)是含有去(qù)垢劑，因此常規Bradford法的使用受到了很大(dà)的限制，通常隻能使用可(kě)以兼容去(qù)垢劑但(dàn)檢測比較耗時的BCA法。但(dàn)BCA法無法兼容還(hái)原劑。當蛋白(bái)樣品中同時含有一定濃度的去(qù)垢劑和還(hái)原劑時，常規的Bradford法和BCA法都(dōu)無法使用，而本試劑盒仍然是可(kě)以檢測的。試劑盒兼容蛋白(bái)提取的多種裂解液，包括 Western及IP細胞裂解液、RIPA裂解液、NP-40裂解液、SDS裂解液等。

按照(zhào)每個10 μl樣品使用300 μl染色染色液計(jì)算，試劑盒可(kě)以至少檢測800個樣品。

● 産品特點：

1. 檢測速度快(kuài)，10-20個樣品隻需不足10分(fēn)鍾即可(kě)完成。

2. 靈敏度高，檢測濃度下限可(kě)達25 μg/ml （測定濃度範圍在50-1000 μg/ml内有較好的線性關系），最小檢測蛋白(bái)量可(kě)達0.5 μg。

3. 該試劑盒測定蛋白(bái)濃度不受絕大(dà)部分(fēn)樣品中的化學物質的影(yǐng)響。樣品中β-巯基乙醇的濃度可(kě)高達1 M，DTT的濃度可(kě)高達5 mM。同時，此方法測定蛋白(bái)濃度可(kě)以兼容受高濃度的去(qù)垢劑影(yǐng)響，可(kě)以适用于膜蛋白(bái)樣品的濃度測定。蛋白(bái)樣品中SDS濃度低于1%，Triton X-100濃度低于1%，Tween 20, 60, 80濃度低于1%，NP-40濃度低于1%都(dōu)可(kě)以定量。

● 操作(zuò)方法：

用前注意事(shì)項：

蛋白(bái)标準請(qǐng)全部溶解混勻後再使用。

需可(kě)檢測560-610 nm之間波長的酶标儀一台，最佳檢測波長爲595 nm。并需96孔微孔闆。

微孔闆測定程序：（最佳工(gōng)作(zuò)範圍50-1000 μg/ml）

1． G-250染液在使用前應平衡溫度至常溫并溫和颠倒混勻。

2． 1 mg/ml蛋白(bái)标準品配制：常溫完全溶解蛋白(bái)标準品，取20 μl 5 mg/ml BSA蛋白(bái)标準溶液，加入80 μl PBS溶液，使其終濃度爲1 mg/ml。

3． 按照(zhào)下表配制BSA标準測定溶液：

4． 取10 μl不同濃度蛋白(bái)标準加到96孔微孔闆的蛋白(bái)标準孔中。

5． 将适當體(tǐ)積的待測樣品加入到微孔闆中，如(rú)果樣品不足10 μl，用PBS補足到10 μl；

6． 向微孔闆中加入300 μl G-250染色液，混勻，常溫放(fàng)置 3-5 min。

7． 用酶标儀測定A₅₉₅波長的吸光(guāng)度，以不含BSA 的樣品的光(guāng)吸收值作(zuò)爲空白(bái)對照(zhào)。可(kě)以立即測定吸光(guāng)度，也可(kě)以在30分(fēn)鍾内測定，30分(fēn)鍾内檢測數據無顯著變化。對于不含去(qù)垢劑和含有某些去(qù)垢劑的情況，在2小時内檢測數據無顯著變化；對于含有某些特定去(qù)垢劑的情況，在2小時内檢測數據會有一定的變化，但(dàn)仍然會呈現較好的線性關系。

8． 以A₅₉₅爲縱坐(zuò)标，BSA含量爲橫坐(zuò)标，繪制标準曲線，計(jì)算樣品中的蛋白(bái)濃度。如(rú)果所得(de)到的蛋白(bái)濃度不在标準曲線範圍内，請(qǐng)稀釋樣品後重新測定。

注：如(rú)使用分(fēn)光(guāng)光(guāng)度計(jì)測定，可(kě)根據實際需要擴大(dà)溶液體(tǐ)積，保證蛋白(bái)标準溶液和蛋白(bái)樣品與 G-250染液的體(tǐ)積比爲 10:300，例如(rú)，如(rú)果需要 1.5 ml，可(kě)取蛋白(bái)樣品 50 μl，G-250染液試劑 1.5 ml。

 試劑盒對常見(jiàn)去(qù)垢劑的兼容性