RTScript All-in-One 1st-Strand cDNA Synthesis Kit
● 産品貨号及規格：
|
貨号
|
包裝
|
貯存
|
|
RTR2103-01
|
50次×20μl
|
-20℃
|
● 産品組成：
|
組成
|
包裝
|
|
5×RTScript 1st Strand cDNA Synthesis
MasterMix
|
200 μl
|
|
gDNA Remover
|
50 μl
|
|
10×gDNA Remover Buffer
|
100 μl
|
|
RNase-free H2O
|
1 ml
|
● 産品簡介：
本試劑盒含有反轉錄需要的全部試劑（RTScript MMLv Reverse Transcriptase，RNase Inhibitor，dNTP、反應
Buffer，Oligo (dT)18，Random primer）,濃度爲5×。進行RNA反轉錄反應時，隻需加入模闆和RNase Free H2O 即可(kě)高效合成第一鏈cDNA，大(dà)大(dà)簡化了操作(zuò)過程、提高了效率、減少了操作(zuò)過程中的人(rén)爲誤差。本制品含有去(qù)基因組成分(fēn)gDNA Remover，以RNA爲模闆進行cDNA第一鏈合成時，可(kě)以同步去(qù)除基因組DNA污染，與傳統DNaseI消化對比，gDNA Remover消化後無需加入EDTA進行失活；反應結束後，65℃加熱(rè)2分(fēn)鍾，就(jiù)可(kě)以不可(kě)逆失活。具有快(kuài)速簡便、重複性高、特異性好、靈敏度高和穩定性好的特點。該試劑盒采用的反轉錄酶去(qù)除了 RNase H活性，從(cóng)而避免反轉錄過程中降解RNA。 同時經過突變文庫篩選，使得(de)其熱(rè)穩定性更強，可(kě)耐受50℃高溫反應。相(xiàng)比于低溫條件(jiàn)下反轉錄反應，采用高溫反轉錄可(kě)顯著打開 RNA二級結構，從(cóng)而提高複雜 RNA 模闆的擴增性能、提高反轉錄 cDNA的長度（可(kě)以獲得(de)12 kb cDNA）和産量，從(cóng)而提高後續檢測的靈敏度。合成的第一鏈 cDNA可(kě)廣泛用于 2nd
Strand 的合成、 雜交、 PCR擴增、Real-Time PCR 反應等。
● 貯存和運輸：
開封後-20℃貯存兩年(nián)；濕冰運輸。
● 使用方法：
一. 去(qù)除基因組DNA污染：
1.1冰上配制如(rú)下體(tǐ)系：
|
組份
|
加入體(tǐ)積
|
|
Total
RNA/mRNA
|
100ng-2μg(＜8
μl)
|
|
gDNA
Remover
|
1μl
|
|
10×gDNA
Remover Buffer
|
1
μl
|
|
RNase-free
H2O
|
up
to 10 μl
|
1.2輕柔混勻，快(kuài)甩離(lí)心，37℃處理(lǐ) 2 min，去(qù)除基因組污染，冰上放(fàng)置。
注：若RNA中基因組DNA污染嚴重，可(kě)以延長37℃處理(lǐ)5
min。
1.3
65℃處理(lǐ)2 min，失活gDNA Remover，冰上放(fàng)置。
二. 第一鏈cDNA合成（反轉錄反應）：
2.1冰上配制如(rú)下體(tǐ)系：
|
組份
|
加入體(tǐ)積
|
|
步驟1中的反應液
|
10
μl
|
|
5×RTScript
1st Strand cDNA Synthesis MasterMix
|
4
μl
|
|
RNase-free
H2O
|
6
μl
|
2.2
反轉錄：輕柔混勻，快(kuài)甩離(lí)心； 50℃孵育15 min，
2.3
終止反應：85℃孵育 5 min，終止反應。
反應産物可(kě)直接用于 PCR，如(rú)果不立即使用，-20℃
保存，長時間保存建議(yì)-80℃ 放(fàng)置。
● 注意事(shì)項：
5×RTScript 1st Strand cDNA Synthesis
MasterMix中已經包含Oligo (dT)18和Random primer，不僅适用于包含poly(A)結構的真核生(shēng)物mRNA，也适用于不含poly(A)結構的原核生(shēng)物RNA，真核生(shēng)物rRNA和tRNA等模闆，但(dàn)不适用于miRNA等小RNA模闆。