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Taq plus DNA聚合酶

Taq plus DNA聚合酶

産品編号:RTS3102-02

産品規格:500U

相(xiàng)關規格:
數量
價格 ¥200

Taq plus DNA Polymerase

高效率、高保真DNA聚合酶

目錄号

濃度

包裝

RTS3102-02

5 U/μl

500 U 100μl

RTS3102-03

5 U/μl

5×500 U5×100μl

貯存

  -20℃保存一年(nián)。

産品簡介

Taq plus DNA Polymerase是由pfu DNA Polymerase和Taq DNA聚合酶按照(zhào)一定的比例混合而成,具有擴增效率高,錯配率低的特點。與Taq DNA聚合酶相(xiàng)比,Taq plus DNA聚合酶具有擴增長度長,保真性好的優點;與pfu DNA聚合酶相(xiàng)比,具有擴增速度快(kuài),反應效率高的優點。此酶具有比Taq DNA聚合酶約3倍的PCR可(kě)信度。該酶的大(dà)多數PCR産物3’端帶堿基A,可(kě)以通過TA克隆法進行克隆。

産品組成(RTS3102-02

Taq plus DNA Polymerase(5U/μl)                   100μl

10×Taq plus PCR buffer(含Mg2)                    1ml

活性定義

1單位(U) Taq plus DNA Polymerase活力定義爲在74℃、30分(fēn)鍾内,以活性化的大(dà)馬哈魚精子DNA作(zuò)爲模闆/引物,将10 nmol脫氧核苷酸摻入到酸不溶物質所需的酶量。

酶貯存緩沖液

50 mM Tris-HCl (pH 8.0);0.1 mMEDTA;1 mMDTT;50 mMKCl ; Stabilizers; 50% glycerol

适用範圍

适用于要求保真性和高效率的PCR反應,大(dà)多數情況下可(kě)以替代Taq DNA 聚合酶。

使用說(shuō)明:

1. 按照(zhào)下表在0.2ml PCR管中制備反應體(tǐ)系:

成分(fēn)

體(tǐ)積

終濃度

Template

0.1-1μg

as you wish

Primer 110 μM

1μl

200nM

Primer 210 μM

1μl

200nM

10×Taq plus PCR buffer

5μl

dNTP Mixture(10 mM)

1μl

200μM each

Taq plus(5 U/μl)

0.5-1μl

2.5-5U

ddH2O

up to 50μl

-

2. 混勻後,離(lí)心快(kuài)甩将反應液收集到管底。

3. PCR儀如(rú)果沒有熱(rè)蓋加熱(rè)的話(huà),補加25μl礦物油。


4. PCR儀上執行以下程序:

三步法:

步驟

溫度

時間

循環數

初始變性

94

1-5 min

1

變性

94

30 sec

25-40*

退火(huǒ)

Tm-5*

30 sec

延伸

72

1 min/kb

最後延伸

72

5 min

1

*注: PCR 反應條件(jiàn)視模闆、引物等的結構條件(jiàn)不同而各異。在實際操作(zuò)中需根據模闆、目的片段的大(dà)小、堿基序列和引物的長短(duǎn)等具體(tǐ)情況,設定最佳的反應條件(jiàn)(溫度、時間等)。


 

      常見(jiàn)問(wèn)題:

Q1Taq plus DNA polymerase能擴增多長片段?

A1:對簡單模闆(如(rú)λ噬菌體(tǐ)做模闆),可(kě)以擴增  kb片段;對複雜模闆(如(rú)基因組DNA),可(kě)以擴增  kb片段。

 

Q2Taq plus DNA polymerase保真性怎樣?

A2Taq plus含有3-5校(xiào)對活性的聚合酶,有校(xiào)對功能。保真性爲普通Taq酶的3倍。

 

Q3:使用Taq plus DNA polymerase的擴增産物是否可(kě)以進行TA克隆?

A3:由于使用Taq plus得(de)到的PCR産物大(dà)多數帶有A,可(kě)以進行TA克隆。

 

Q4Taq plus DNA polymerase可(kě)以擴增高GC含量片段嗎(ma)?

A6Taq plus可(kě)以擴增高GC含量片段,建議(yì)使用Taq plus配合2×GC buffer使用,而不建議(yì)使用10×Taq plus PCR buffer


Taq Plus DNA Polymerase擴增效果

M: DNA Marker III 

1: Rice PEPCase 8.6kb  

2: Rice PEPCase 5.2kb  

3: Rice PEPCase 3.2kb 

4: pCMV-Myc 3kb  

5: pCMV-Myc 2kb




 
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