核酸快(kuài)速高靈敏度染色試劑盒

● 儲存、運輸及效期

常溫保存；常溫運輸；有效期一年(nián)。

● 産品簡介

核酸快(kuài)速高靈敏度染色試劑盒(Fast and High Sensitivity Stain Kit for Nucleic Acids)是一種快(kuài)速簡單、可(kě)用于聚丙烯酰胺凝膠中的核酸檢測的試劑盒。該方法檢測靈敏度比 EB 高達 200 倍，能檢測到10ng的 DNA條帶，常用于檢測 SSR 标記、SNP 标記等。

本試劑盒可(kě)足夠用于25塊常規的8×10cm凝膠的染色。

說(shuō)明書(shū)後附有實驗記錄表格，方便記錄實驗步驟。

● 産品組成：

● 注意事(shì)項：

1. 由于染色非常靈敏，操作(zuò)時請(qǐng)注意盡量使用高純度的水，并确保所使用的器皿非常清潔，最好使用潔淨的玻璃器皿。操作(zuò)時必須戴手套，避免皮膚和凝膠直接接觸。

2. 需自(zì)備無水乙醇及MilliQ級純水。

3. 下述使用說(shuō)明中各種溶液的使用量适用于大(dà)小爲8×10cm厚度爲0.75-1mm的凝膠。對于更大(dà)的凝膠，各種溶液的使用量需按凝膠面積的比例放(fàng)大(dà)，對于更厚的凝膠，作(zuò)用時間需按照(zhào)厚度的比例适當延長。

4. 本說(shuō)明書(shū)所指的常溫溫度爲20-25℃，操作(zuò)溫度較低時由于溶液的擴散能力下降，各步驟需适當延長時間。

5. 基本顯色液(10×)在低溫環境下可(kě)能會出現沉澱，可(kě)在37℃水浴中溶解，并充分(fēn)混勻後使用。

● 使用方法：

一. 漂洗步驟：

電泳結束後，凝膠中加入100 ml MilliQ級純水，在搖床上常溫搖動2分(fēn)鍾，搖動速度爲60-70rpm；重複此步驟1次。

二. 染色步驟：

2.1 染色：

棄水，加入100 ml即用型染色液，在搖床上常溫搖動5分(fēn)鍾，搖動速度爲60-70 rpm。  

注：即用型染色液配制後需在20分(fēn)鍾内使用。

2.2 水洗滌：

棄原有溶液，加入100 ml MilliQ級純水或雙蒸水，在搖床上室溫搖動15-20秒，搖動速度爲60-70rpm。

注意：水洗滌的時間不能超過20秒。

三. 顯色步驟：

棄水，加入100 ml顯色液，在搖床上室溫搖動3-10分(fēn)鍾，直至出現比較理(lǐ)想的預期核酸條帶，搖動速度爲60-70rpm。

注：顯色加速液(500X)有刺激性氣味，建議(yì)在通風(fēng)櫥内操作(zuò)；

顯色液配制後需在20分(fēn)鍾内使用。

四.  終止步驟：

棄顯色液，加入100 ml MilliQ級純水，在搖床上常溫搖動3-5分(fēn)鍾，搖動速度爲60-70 rpm。

五. 保存：

可(kě)在MilliQ級純水中保存；或采用适當的方式制備成幹膠。

● 常見(jiàn)問(wèn)題：

一.  背景太深：

1.1 顯色時間過長。通常顯色反應會在10分(fēn)鍾内結束，顯色反應時間過長會導緻背景很深。

1.2水的純度太低。需使用大(dà)于16 MΩ·cm的高純度水。

二.  核酸條帶非常淺：

2.1 染色後水洗滌時間過長。在染色溶液染色後需嚴格控制水洗滌的時間，水洗滌的時間不能超過20秒，否則會導緻過多的染色離(lí)子被洗去(qù)，導緻檢測靈敏度下降。

2.2顯色加速液（500×）失效。顯色加速液（500×）不能低溫保存，低溫保存會導緻加速液失效。

三.  凝膠上出現小點或其它非核酸的痕迹：

3.1 凝膠沒有充分(fēn)被溶液浸沒。請(qǐng)注意選擇大(dà)小合适的容器，并加入足量的各種溶液，同時需保持适當的混勻速度确保凝膠可(kě)以被溶液浸沒。

3.2 用于染色的容器沒有充分(fēn)洗滌幹淨。容器需先用洗滌劑充分(fēn)洗滌，随後用自(zì)來(lái)水充分(fēn)沖洗，最後用高純度水再洗滌數次。該容器最好能專用于染色，并注意避免各種可(kě)能的污染。

3.3 指紋或其它壓痕。請(qǐng)注意戴手套操作(zuò)，切勿直接接觸皮膚。操作(zuò)時請(qǐng)注意盡量勿擠壓、折疊或摩擦凝膠。

3.4 有金屬物質接觸凝膠。金屬物質例如(rú)金屬鑷子等接觸凝膠會出現非特異性痕迹。

實驗記錄表格

實驗日(rì)期：

實驗示例：

1 雙鏈DNA染色：

2 單鏈DNA/RNA染色：

使用RTS5101 核酸快(kuài)速高靈敏度染色試劑盒産品發表部分(fēn)文章(zhāng)列表：

1. [2022 IF=8.4] A novel label-free fluorescence aptasensor for dopamine detection based on an Exonuclease III- and SYBR Green I- aided amplification strategy. 

Author：Yanxian Wang, Kai Kang, Sui Wang,Weijun Kang, Cheng Cheng, Ling Mei Niu，Zhiyong Guo. 

Journal: Sensors and Actuators B: Chemical.  2019, 305:127348

Institution：Ningbo University

Paper link：https://doi.org/10.1016/j.snb.2019.127348

2. [2022 IF=8.4] A robust photoluminescence screening assay identifies uracil-DNA glycosylase inhibitors against prostate cancer. 

Author：Guodong Li，Chung-Hang Leung. 

Journal: Chemical Science 2020, 11,1750–1760  

Paper link：https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC8148385

3. [2022 IF=6.0] A novel resonance Rayleigh scattering aptasensor for dopamine detection based on an Exonuclease III assisted signal ampli?cation by G – quadruplex nanowires formation 

Author：Yanxian Wang, Kai Kang, Sui Wang,LiMa, Weijun Kang,Xue Hui Liu, Ling Mei Niu , Zhiyong Guo

Journal: Arabian Journal of Chemistry (2020) 13, 6598–6605 

Institution：Ningbo University

Paper link：https://doi.org/10.1016/j.arabjc.2020.06.016

4. [2022 IF=6] A novel ?uorescent sensor based on aptamer recognition and DNA walker ampli?cation strategy and its determination of 17b-estradiol.

Author: Yajun Zhang, Licong Jia, Wei Wang, Meng Jiang, Hongying Zhang, LingMei Niu

Journal: Arabian Journal of Chemistry. 16 (2023) 105340.

Institution：School of Public Health, Hebei Medical University

Paper link：https://doi.org/10.1016/j.arabjc.2023.105340

5. [2022 IF=5.1] Repurposing sodium stibogluconate as an uracil DNA glycosylase inhibitor against prostate cancer using a time-resolved oligonucleotide-based drug screening platform.

Author: Sang-Cuo Nao, Le-Sheng Huang, Daniel Shiu-Hin Chan, Xueliang Wang, Guo-Dong Li, Jia Wu, Chun-Yuen Wong, Wanhe Wang, Chung-Hang Leung

Journal: Bioorganic Chemistry 144 (2024) 107176.

Institution：University of Macau

Paper link：https://doi.org/10.1016/j.bioorg.2024.107176